短发夹RNA慢病毒载体稳定抑制NLRP3表达的HepG2细胞的构建

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目的:构建针对NLRP3基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,在HepG2细胞中鉴定该载体对NLRP3的抑制效果。方法:设计针对NLRP3基因的shRNA序列,将其插入慢病毒表达载体pWPT-U6-shRNA-CMV-GFP中,将载体与包装质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞,进行病毒包装;得到的病毒原液浓缩后系列稀释为9个浓度递减的病毒液,分别转染293T细胞后进行滴度测定;用获得的慢病毒液感染人肝癌细胞系HepG2,获得稳定沉默NLRP3的细胞株;利用实时定量PCR和Wester
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