去甲斑蝥素对实验性过敏性结膜炎眼部炎症及Th1/Th2平衡的影响及机制

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目的: 探究去甲斑蝥素( norcantharidin,NCTD) 对实验性过敏性结膜炎( allergic conjunctivitis,AC) 大鼠眼部炎症及 Th1 / Th2 平衡的调节作用及其机制。方法: 采用卵清蛋白( OVA) 法建立 SD大鼠 AC 模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、NCTD 低剂量组和 NCTD 高剂量组,除对照组外,其余各组均诱导 AC 模型,NCTD 低、高剂量组分别按 0.05mg·kg-1·d-1、0.1mg·kg-1·d-1给予 NCTD 灌胃,连续 10d; 大鼠 OVA 末次致敏后,观察眼部体征表现并评分,苏木精-伊红( HE) 染色和高碘酸‐希夫( PAS) 染色分别观察角膜与结膜组织病理学变化,酶联免疫吸附法( ELISA) 检测血清中细胞因子 IL-2、IL-4、IL-5、IL-10 及 IFN-γ 的含量,流式细胞术检测脾脏淋巴细胞内 Th1、Th2 细胞比例,实时荧光定量PCR 检测结膜组织 IL-4、IFN-γ mRNA 表达水平,免疫荧光染色检测角膜组织 VEGF 表达,蛋白质印迹( Western Blot) 实验检测结膜组织 VEGF、VEGFR2 蛋白表达水平。结果: 大鼠造模后出现结膜充血红肿,眼裂变小、流泪、分泌物增多等 AC 病理现象,炎症评分高于对照组( P<0.01) ,说明 AC 动物模型构建成功; 经过 NCTD 低剂量组和 NCTD 高剂量组处理的大鼠,结膜充血红肿的现象明显缓解,流泪、分泌物均减少,炎症评分下降,角膜上皮细胞排列较为紧密,新生血管减少,结膜中杯状细胞数目有所增加,血清中 IL-2、IFN-γ 含量升高,IL-4、IL-5 及 IL-10 含量降低,脾脏中 Th1 细胞比例和 Th1/Th2 比值均增加,Th2 细胞比例则减少,结膜组织中 IFN-γ mRNA 表达上调、IL-4 mRNA 表达下调( P 均<0.01) ; 同时,角膜组织中 VEGF 阳性表达率减少,结膜组织中 VEGF、VEGFR2 蛋白表达均下调( P 均<0.01) ; 此外,NCTD 高剂量的作用效果优于 NCTD 低剂量( P 均<0.01) 。结论: 去甲斑蝥素能够缓解实验性过敏性结膜炎大鼠的病变进程,改善 Th1/Th2 细胞免疫失衡,其机制可能与抑制 VEGF 途径相关。
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