背景 p16INK4a基因在细胞老化和早衰过程中发挥着重要作用,是目前已知的细胞衰老的主导基因.角膜内皮细胞(CECs)周期停滞于G1期且体内缺乏增生能力,是否与细胞衰老有关尚未得知. 目的 探讨不同年龄的正常人CECs中p16INK4a基因及其抑制基因Bmi1的表达. 方法 收集临床上DX液保存的行角膜移植手术后剩余的供体周边环状角膜组织,记录供体年龄.经锥虫蓝-茜素红双染法观察CECs的活性；行苏木精-伊红染色以证实角膜材料的组织结构正常.将收集到的角膜环材料按照年龄分为＜30岁组、30～ 50岁组和＞50岁组,每组30个角膜环,其中15个用于总RNA提取,另外15个角膜环等分为3份,分别用于免疫组织化学检测、免疫荧光检测和CECs活性的观察.提取每个角膜环的总RNA,行实时荧光定量PCR检测,观察p16INK4a mRNA、Bmi1 mRNA和Ki67 mRNA在CECs中的表达.行冰冻切片免疫组织化学染色,检测p16INK4a 、Bmi1和Ki67蛋白在CECs中的表达.免疫荧光法检测p16INK4a在CECs的表达. 结果 苏木精-伊红染色结果显示,供体角膜上皮、基质和内皮结构完整,排列规则.实时荧光定量PCR检测显示随年龄增长,p16INK4a mRNA的表达增强,而Bmi1 mRNA和Ki67 mRNA的表达减弱,差异均有统计学意义(F=5.703,P=0.014;F=3.950,P=0.042;F=548.500,P=0.000),其中与＜30岁组比较,＞50岁组p16INK4a mRNA在CECs中的表达量明显升高,而Bmi1 mRNA和Ki67 mRNA的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P=0.006、0.013、0.000).免疫组织化学结果可见,p16INK4a蛋白在各组CECs中均有表达,主要位于细胞核内,而Bmi1与Ki67在年老供体的表达强度均弱于年轻供体,与实时荧光定量PCR的结果基本一致.免疫荧光染色显示,年老供体CECs p16INK4a的表达强度强于年轻供体. 结论 细胞衰老主导基因p16INK4a的表达随年龄增加而增高,其抑制基因Bmi1的表达随年龄增加而降低。