【摘 要】
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目的 建立多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,mPCR)法检测3种常见血清型沙门氏菌的分析方法.方法 以肠炎沙门氏菌Hat基因、鼠伤寒沙门氏菌Stm-4495基
【机 构】
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广州城市职业学院食品系, 广州 510640
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目的 建立多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,mPCR)法检测3种常见血清型沙门氏菌的分析方法.方法 以肠炎沙门氏菌Hat基因、鼠伤寒沙门氏菌Stm-4495基因、乙型副伤寒沙门氏菌sdfI基因设计合成特异性引物,提取沙门氏菌基因组DNA为扩增模板,验证引物特异性,优化多重PCR退火温度及引物浓度,检测方法特异性及检出限,并利用该方法对人工污染冷鲜鸡肉进行检测.结果 3对引物特异性强且无交叉影响;25μL多重反应体系中,引物STM、HAT、SDF最佳终浓度分别为:0.5、0.5、0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃;11株阴性对照菌无目标条带检出,方法特异性良好,以3种血清型沙门氏菌纯培养物DNA混合物为模板,检出限低至DNA质量浓度1 pg/μL;人工污染鸡肉经过12 h增菌,能同时检测出3种血清型沙门氏菌的检测限为:肠炎沙门氏菌(4.0±1.0)CFU/g、鼠伤寒沙门氏菌(8.0±0.9)CFU/g、乙型副伤寒沙门氏菌(8.0±0.6)CFU/g.结论 本方法特异性强、检测限低,对食品中3种常见血清型沙门氏菌快速检测具有重要意义.
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