论文部分内容阅读
目的
观察高糖环境中足细胞核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2（NOD2）、上皮-间质转分化（EMT）相关蛋白的表达，探讨NOD2参与EMT的分子机制。
方法常规方法培养人肾小球足细胞，高糖刺激后细胞免疫荧光法检测EMT相关蛋白α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、nephrin的表达；实时荧光定量PCR和Western印迹法检测NOD2、锌指转录因子（Snail）和足细胞EMT相关蛋白α-SMA、结蛋白（Desmin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）及Nephrin的表达。shRNA干扰NOD2表达后再给予高糖刺激细胞，Western印迹法检测Snail及后续EMT相关蛋白的表达情况。用shRNA干扰Snail表达后，胞壁酰二肽（MDP）活化NOD2，Western印迹法检测E-cadherin、Nephrin、Desmin、α-SMA的表达。
结果高糖刺激24 h后，与正常对照组相比，高糖组NOD2、Snail mRNA和蛋白的表达明显增加；上皮表型蛋白E-cadherin、Nephrin mRNA和蛋白的表达下调，间质表型蛋白Desmin、α-SMA mRNA和蛋白的表达上调（均P<0.05）；高渗对照组无明显变化。干扰NOD2表达后，Snail及EMT相关蛋白表达异常均得到恢复，与高糖组相比差异有统计学意义（均P<0.05）。与MDP组相比，MDP+shRNA-Snail组细胞E-cadherin、Nephrin蛋白的表达明显增加；Desmin、α-SMA表达明显减少（均P<0.05）。
结论高糖可诱导足细胞NOD2表达，并通过上调Snail表达促进足细胞上皮-间质转分化。以NOD2/Snail/EMT通路为靶点的基因干预可减轻高糖引起的足细胞损伤，可能为糖尿病肾病的治疗提供新思路。