【摘 要】
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【背景】目前犬布鲁氏菌病诊断存在一定的困难。【目的】筛选并研究犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株的特异性抗原表位。【方法】利用噬菌体肽库展示技术，以犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株作为靶分子，包被酶标板，用12肽随机肽库经过3轮生物淘洗程序进行筛选。经过3轮筛选后，噬菌体产出率从5.00×10-7增加到9.84×10-6，假阳性率逐轮降低。从第3轮筛选的阳性克隆中随机挑取14个进行扩增，提取基因组，进行
【机 构】
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中国兽医药品监察所国家/OIE布鲁氏菌病参考实验室
【基金项目】
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国家“万人计划”科技创新领军人才；
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【背景】目前犬布鲁氏菌病诊断存在一定的困难。【目的】筛选并研究犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株的特异性抗原表位。【方法】利用噬菌体肽库展示技术，以犬种布鲁氏菌单克隆抗体4H3株作为靶分子，包被酶标板，用12肽随机肽库经过3轮生物淘洗程序进行筛选。经过3轮筛选后，噬菌体产出率从5.00×10-7增加到9.84×10-6，假阳性率逐轮降低。从第3轮筛选的阳性克隆中随机挑取14个进行扩增，提取基因组，进行测序分析；并通过iELISA和cELISA检测阳性克隆的亲和性和特异性。【结果】14株阳性单克隆噬菌体共出现3种不同的短肽序列，分别是KMSIRHPIRLPI、ILRRRRKRIIQI、QRIHMRLTTQS；iELISA结果表明3种短肽序列与单克隆抗体的亲和性依次为KMSIRHPIRLPI>ILRRRRKRIIQI>QRIHMRLTTQS；cELISA结果显示短肽KMSIRHPIRLPI、ILRRRRKRIIQI特异性较强。对亲和性较强、特异性较高的两条短肽KMSIRHPIRLPI和ILRRRRKRIIQI展开具体分析，比对分析KMSIRHPIRLPI与犬种布鲁氏菌RM6/66菌株的肽酶C26家族蛋白（PuuD）有比较高的相似性，氨基酸符合率为75%，且存在4位连续相似氨基酸；ILRRRRKRIIQI与布鲁氏菌6/66菌株中3-氧酰基-[酰基载体蛋白]还原酶（OAR）相似性较高，氨基酸符合率为75%，存在2位连续相似氨基酸。【结论】利用噬菌体肽库展示技术筛选出与犬种布鲁氏菌ZG分离株单克隆抗体特异性结合的短肽序列。
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