补肾化痰方对去卵巢大鼠骨形成的影响及其作用机制研究

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目的:观察补肾化痰方对去卵巢大鼠骨形成的影响及其作用机制。方法:将30只6月龄SPF级雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补肾化痰组,每组10只。模型组和补肾化痰组大鼠手术摘除双侧卵巢,假手术组不摘除卵巢,只切除卵巢周围与双侧卵巢质量相等的脂肪组织。造模术后5周开始,补肾化痰组以0. 94 g·m L-1补肾化痰方药液灌胃,假手术组和模型组以等体积生理盐水灌胃,均每天1次,连续干预8周。药物干预结束后,将所有大鼠处死,摘除双侧眼球取血检测血清骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)-2、Runt相关转录因子(Runt related transcription factor,RUNX)-2含量,取左侧股骨行Micro CT扫描测定骨密度、骨小梁数量、骨小梁平均厚度、骨小梁分离度,取右侧股骨上端部分骨片以蛋白免疫印迹法测定骨组织中BMP-2、RUNX-2含量,取右侧股骨下端部分骨片以免疫组织化学法检测BMP-2、RUNX-2的定位。结果:(1)一般情况。所有大鼠均在造模手术麻醉34 h后完全清醒,正常进食,1周后切口完全愈合。药物干预过程中,模型组1只大鼠死亡、补肾化痰组2只大鼠死亡。(2)血清BMP-2、RUNX-2含量检测结果。3组大鼠的血清BMP-2含量比较,差异有统计学意义[(245. 40±10. 10) pg·m L-1,(111. 03±29. 75) pg·mL-1,(190. 35±14. 00) pg·mL-1,F=109. 998,P=0. 000];模型组、补肾化痰组的血清BMP-2含量均低于假手术组(P=0. 000,P=0. 000),补肾化痰组的血清BMP-2含量高于模型组(P=0. 000)。3组大鼠的血清RUNX-2含量比较,差异有统计学意义[(4 131. 04±277. 39) pg·mL-1,(1 601. 09±266. 10) pg·mL-1,(3 134. 90±202. 33) pg·mL-1,F=237. 192,P=0. 000];模型组、补肾化痰组的血清RUNX-2含量均低于假手术组(P=0. 000,P=0. 000),补肾化痰组的血清RUNX-2含量高于模型组(P=0. 000)。(3)股骨Micro CT扫描结果。3组大鼠骨密度比较,差异有统计学意义[(556. 90±8. 86) mg HA·cm-3,(498. 81±9. 26) mg HA·cm-3,(530. 17±10. 70) mg HA·cm-3,F=90. 488,P=0. 000];模型组、补肾化痰组的骨密度均低于假手术组(P=0. 000,P=0. 000),补肾化痰组的骨密度高于模型组(P=0. 000)。3组大鼠骨小梁数量比较,差异有统计学意义[(2. 65±0. 32)个·mm-1,(1. 74±0. 22)个·mm-1,(2. 41±0. 33)个·mm-1,F=23. 900,P=0. 000];模型组的骨小梁数量少于补肾化痰组和假手术组(P=0. 000,P=0. 000),补肾化痰组的骨小梁数量与假手术组比较,差异无统计学意义(P=0. 224)。3组大鼠骨小梁平均厚度比较,差异有统计学意义[(109. 33±16. 12)μm,(79. 27±18. 17)μm,(95. 73±11. 38)μm,F=8. 730,P=0. 001];模型组的骨小梁平均厚度低于假手术组(P=0. 001),补肾化痰组的骨小梁平均厚度分别与假手术组和模型组比较,差异无统计学意义(P=0. 181,P=0. 098)。3组大鼠骨小梁分离度比较,差异有统计学意义[(350. 95±68. 46)μm,(472. 33±33. 70)μm,(406. 68±47. 77)μm,F=12. 460,P=0. 000];模型组、补肾化痰组的骨小梁分离度均高于假手术组(P=0. 000,P=0. 036),补肾化痰组的骨小梁分离度低于模型组(P=0. 017)。(4)股骨组织中BMP-2、RUNX-2蛋白含量检测结果。3组大鼠股骨组织中的BMP-2含量比较,差异有统计学意义(0. 73±0. 03,0. 26±0. 02,0. 48±0. 02,F=738. 111,P=0. 000);模型组、补肾化痰组股骨组织中的BMP-2含量均低于假手术组(P=0. 000,P=0. 000),补肾化痰组股骨组织中的BMP-2含量高于模型组(P=0. 000)。3组大鼠股骨组织中的RUNX-2含量比较,差异有统计学意义(0. 67±0. 03,0. 36±0. 03,0. 47±0. 02,F=286. 493,P=0. 000);模型组、补肾化痰组股骨组织中的RUNX-2含量均低于假手术组(P=0. 000,P=0. 000),补肾化痰组股骨组织中的RUNX-2含量高于模型组(P=0. 000)。(5)股骨组织中BMP-2、RUNX-2蛋白定位检测结果。BMP-2、RUNX-2的阳性表达主要位于骨髓基质细胞胞浆及骨小梁周边成骨细胞中,光学显微镜下阳性表达蛋白呈棕黄色颗粒。结论:补肾化痰方能通过调节BMP-2/Smads/RUNX-2信号转导通路,促进去卵巢大鼠的骨形成。
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