【摘 要】
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本文将鼠源VH-CDR3库(library of murine VH-CDR3)移植到特定的人源scFv(single-chain antibody fragment)VH3-VΚ1框架构建人源化scFv文库,快速筛选抗VSTM1-v2的人源化单链
【机 构】
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四川抗菌素工业研究所,成都生物制品研究所有限责任公司,
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本文将鼠源VH-CDR3库(library of murine VH-CDR3)移植到特定的人源scFv(single-chain antibody fragment)VH3-VΚ1框架构建人源化scFv文库,快速筛选抗VSTM1-v2的人源化单链抗体。以抗VSTM1-v2鼠源cDNA为模板,扩增出鼠源VH-CDR3库,随后将鼠源VH-CDR3库移植到人源scFv(VH3-VΚ1)上并通过核糖体展示富集抗VSTM1-v2人源化scFv文库,该文库序列通过与原核基因表达调控等成分(N端添加T7启动子、SD序列和PelB序列、C端添加his标签序列和T7 terminal序列)拼接,构建表达型TA载体转化大肠杆菌BL21(DE3)进行可溶性表达。最终构建了一个库容达1012的人源化单链抗体文库,完成了1 000个克隆的初步鉴定,并筛选出EC50达21.35 nmol·L 1的抗VSTM1-v2人源化scFv。该研究结果,一方面获得了具有潜在应用价值的抗-VSTM1-v2先导抗体;另一方面,为快速获得人源化抗体提供了一个新技术途径。
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