带有穿膜肽重组PTD—Sox2的制备及活性鉴定

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目的:制备带有穿膜肽的重组蛋白PTD—sox2并对其活性进行鉴定。方法:通过将Sox2基因与穿膜肽基因PTD融合,利用原核表达载体pKYB 进行丧达,用Ni柱制备、纯化融合蛋白;用Westernblot对其进行鉴定;用FITC标记PTD—Sox2,与CHO细胞孵育,检测其穿膜能力:用FRET法检测转录因子Sox2结合目的DNA的活性。结果:构建了带有穿膜肽重组PTD—Sox2的原核表达菌,制备并纯化PTD—Sox2,对其活性鉴定。结论:PTD—Sox2能够穿过细胞膜与核膜,进入细胞核内,穿膜效率为40.8
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