【摘 要】
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目的:探讨circ-SOD2/miR-424-5p分子轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其可能作用机制.方法:用脂多糖(LPS)诱导的滑膜成纤维细胞建立类风湿关节炎模型(LPS组);实验分组:Con 组、LPS+si-NC 组、LPS+si-circ-SOD2组、LPS+miR-NC 组、LPS+miR-424-5p 组、LPS+si-circ-SOD2+anti-miR-NC 组、LPS+si-circ-SOD2+anti-miR-424-5p 组;采用实时荧光定量 PCR 法检测 cir
【机 构】
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四川省骨科医院药学部,四川成都 610041
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目的:探讨circ-SOD2/miR-424-5p分子轴对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响及其可能作用机制.方法:用脂多糖(LPS)诱导的滑膜成纤维细胞建立类风湿关节炎模型(LPS组);实验分组:Con 组、LPS+si-NC 组、LPS+si-circ-SOD2组、LPS+miR-NC 组、LPS+miR-424-5p 组、LPS+si-circ-SOD2+anti-miR-NC 组、LPS+si-circ-SOD2+anti-miR-424-5p 组;采用实时荧光定量 PCR 法检测 circ-SOD2与 miR-424-5p的表达量;采用ELISA法检测TNF-α、IL-6的水平;采用MTT实验、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测circ-SOD2与miR-424-5p的靶向关系;采用 Western blot 法检测 Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白表达量.结果:与 Con 组比较,LPS 组 circ-SOD2的表达水平升高(P＜0.05),细胞增殖率与TNF-α、IL-6的水平升高(P＜0.05),克隆形成数增多(P＜0.05),miR-424-5p 的表达水平降低(P＜0.05),凋亡率与 Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白水平降低(P＜0.05);与LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ-SOD2组细胞增殖率与TNF-α、IL-6的水平降低(P＜0.05),克隆形成数减少(P＜0.05),miR-424-5p 的表达水平升高(P＜0.05),凋亡率与 Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白水平升高(P＜0.05);circ-SOD2能够靶向调控 miR-424-5p;与 LPS+miR-NC 组比较,LPS+miR-424-5p组TNF-α、IL-6的水平降低(P＜0.05),细胞增殖率降低(P＜0.05),克隆形成数减少(P＜0.05),凋亡率与Fas、FADD、caspase-8、caspase-3蛋白水平升高(P＜0.05),而共转染 si-circ-SOD2与 anti-miR-424-5p 可明显逆转干扰circ-SOD2表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症、增殖、克隆形成与凋亡的作用.结论:干扰circ-SOD2表达可通过靶向调控miR-424-5p而抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症反应、增殖、克隆形成及诱导细胞凋亡.
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