碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌的耐药机制及同源性分析

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目的了解碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌的耐药机制及同源性。方法2012年1-9月,收集从笔者单位收治的烧伤、重症肺炎、糖尿病、慢性阻塞性肺炎、心肌炎、肝移植、脑出血患者的痰液、尿液、血液、脓液、引流液中分离的铜绿假单胞菌(经鉴定)812株。采用全自动微生物鉴定及药敏分析系统测定菌株对哌拉两林、亚胺培南等15种临床常用抗菌药物的耐药性。针对碳青霉烯类抗牛素耐药菌株,采用亚胺培南一乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验及亚胺培南-EDTA和头孢他啶-EDTA增效试验筛选产金属B内酰胺酶(MBL)菌株,改良Hodge试验筛选产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)菌株;PCR法检测菌株的碳青霉烯酶基因、质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基闲及可移动基因元件,对比分析碳青霉烯酶基闲阳性和阴性菌株PMQR基因携带水平;肠杆菌基闪间重复共有序列(ERIC)-PCR法对菌株进行基闲分型,分析同一谱型菌株的来源及耐药基因。对数据行Fisher确切概率法分析。结果812株铜绿似单胞菌对头孢曲松和复方磺胺甲噁唑的耐药率高,分别为83.07%和88.19%;对其他l3种抗生素耐药率为17.30%~55.18%。共筛选出24株碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌,其叶11l株产MBI.、2株产KPC。碳青霉烯酶基闶检测,检出1l株携带VIM-2酶基l矧blaVIM-2,占45.83%;2株携带KPC-2酶基因blakpc"占8.33%。PMQR基因检测,检出14株仅携带acc(6t)-Ib-Cr基因,占58.33%;3株(12.50%)同时携带aCC(6)-lb-cr、qnr基因(包括l株qnrAl、2株qnrB4)。可移动基因元件检测,检l叶J10株仅携带ISCRl基因,占41.67%;6株携带ISEep】基因,占25.00%;3株同时携带前2种基因,占12.50%;1株同时携带1类整合子基因、ISEepl荩斟,占4.17%。13株碳青霉烯酶基因阳性菌株中12株携带1或2种PMQR基因,显著高于碳青霉烯酶基川阴性菌株PMQR基因携带水平(仅5株携带1种,P=0.023)。ERIC-PCR分型显示24株铜绿似单胞菌共分成了6个谱型,A型13株占54.17%,标本主要来源于烧伤科,其中脓液和血液标本最多,8株同时携带blaVIM-2、(/CC简0-lb-er和ISCRI基闪;B型5株占20.83%,标本主要为ICU病区痰液标本,其中2株同时携带碳青霉烯酶基刚、PMQR基因、可移动基因元件;C、D型各2株,均^8.33%,各谱型菌株均来门不同科室,携带不同类型耐药基因;E、F型各l株,均占4.17%。结论笔者单位2012年铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制以产VIM-2的MBI。为主,其次为KPC-2;A型为最流行基凼型;碳青霉烯酶基因与PMQR基因存在共同携带现象,且多为克隆株的流行。

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