【摘 要】
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目的 建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应 (reverse transcription- polymerase chain reac-tion,RT- PCR)法检测 bcl- 2基因 m RNA表达。方法 应用 T- A克隆技术构建含 b
【机 构】
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福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所,福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所,福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所,福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所,福建医科大学附属协和医院
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目的 建立实时荧光定量反转录聚合酶链反应 (reverse transcription- polymerase chain reac-tion,RT- PCR)法检测 bcl- 2基因 m RNA表达。方法 应用 T- A克隆技术构建含 bcl- 2基因的载体作为标准模板 ,采用荧光 Taq man方法及探针标记技术 ,建立实时荧光定量 RT- PCR方法 ,制备标准曲线 ,检测bcl- 2反义核酸治疗前后人类 Burkitt’s淋巴瘤裸鼠模型中瘤细胞的 bcl- 2 m RNA表达水平变化 ,并与半定量 RT- PCR检测结果进行比较。结果 实时荧光定量 RT- PCR检测 bcl- 2反义核酸治疗组的瘤细胞 bcl- 2m RNA表达明显降低 ,而 bcl- 2无义核酸对照组及空白对照组的瘤细胞 bcl- 2 m RNA表达仍较高 ,且显示无义核酸对照组与空白对照组的 bcl- 2 m RNA表达水平相近。半定量 RT- PCR结果显示 bcl- 2出现类似的变化趋势。结论 所建立的实时荧光定量 RT- PCR用于检测 bcl- 2 m RNA表达 ,结果用拷贝数表示 ,比半定量 RT- PCR更灵敏、准确
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