【摘 要】
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目的 探讨趋化因子12(CXCL12)/趋化因子受体4(CXCR4)通路在人肺腺癌细胞诱导破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化中的作用及其可能的分子机制.方法 以小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7为破骨细胞前体细胞,随机分为干预组和对照组.两组均在Transwell小室的下室接种RAW264.7细胞,上室接种人肺腺癌细胞A549;干预组在小室内分别加入含12.5、25.0、50.0、100.0 μg/mL CXCR4竞争性拮抗剂AMD3100的培养基,对照组仅加入培养基;培养7d后取两组细胞,行抗酒石酸
【机 构】
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桂林医学院第二附属医院呼吸与危重症医学科,广西桂林541199
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目的 探讨趋化因子12(CXCL12)/趋化因子受体4(CXCR4)通路在人肺腺癌细胞诱导破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化中的作用及其可能的分子机制.方法 以小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7为破骨细胞前体细胞,随机分为干预组和对照组.两组均在Transwell小室的下室接种RAW264.7细胞,上室接种人肺腺癌细胞A549;干预组在小室内分别加入含12.5、25.0、50.0、100.0 μg/mL CXCR4竞争性拮抗剂AMD3100的培养基,对照组仅加入培养基;培养7d后取两组细胞,行抗酒石酸碱性磷酸酶(TRAP)染色并计数分化成的破骨细胞数量,qPCR检测Transwell下室破骨细胞标志基因组织蛋白酶K(CTSK)、降钙素受体(CTR)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、破骨细胞分化因子受体(RANK)mRNA,ELISA法检测小室上清液CXCL12、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α).结果 干预组在12.5、25.0、50.0、100.0 μg/mL AMD3100处理后,RAW264.7细胞向破骨细胞分化数量分别为(81±3)、(49±3)、(34±3)、(11±2)个,均低于对照组的(99±5)个(P均＜0.05);且随着AMD3100处理浓度的增加,RAW264.7细胞向破骨细胞分化数量逐渐减少(P均＜0.05).与对照组比较,干预组在不同浓度AMD3100干预后破骨细胞标志基因CTSK、CTR、TRAP、RANK mRNA表达减少,小室上清液CXCL12、IL-6、TNF-α水平降低(P均＜0.05);且随着AMD3100处理浓度的增加,破骨细胞各标志物表达逐渐减少,小室上清液CXCL12、IL-6、TNF-α水平逐渐降低(P均＜0.05).结论 抑制CXCL12/CXCR4通路可减少人肺腺癌细胞诱导破骨细胞前体细胞向破骨细胞分化,该作用可能是通过减少IL-6、TNF-α表达实现的.
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