【摘 要】
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目的 探讨神经干细胞不同的分离、纯化方法,并对分离和纯化后的细胞活性和纯度进行比较.方法 ①神经干细胞的分离:分离出生24 h内ICR小鼠的大脑,去除小脑和嗅球,切碎后分别用机械吹打法(mechanical pipetting)、胰酶消化法(trypsin digestion)、PDD酶消化法(papain-Protease-DNase enzyme digestion,PDD)消化脑组织,过筛离心后以1×109·L-1的密度接种,用无血清培养基悬浮培养,观察比较NSCs的活性、增殖及杂细胞数.②神经干细
【机 构】
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南京中医药大学药学院,江苏省中药药效与安全性评价重点实验室,江苏 南京 210023
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目的 探讨神经干细胞不同的分离、纯化方法,并对分离和纯化后的细胞活性和纯度进行比较.方法 ①神经干细胞的分离:分离出生24 h内ICR小鼠的大脑,去除小脑和嗅球,切碎后分别用机械吹打法(mechanical pipetting)、胰酶消化法(trypsin digestion)、PDD酶消化法(papain-Protease-DNase enzyme digestion,PDD)消化脑组织,过筛离心后以1×109·L-1的密度接种,用无血清培养基悬浮培养,观察比较NSCs的活性、增殖及杂细胞数.②神经干细胞的纯化:分离出生24 h的小鼠脑组织,利用差速离心法和过筛法纯化NSCs,通过免疫荧光法鉴定纯度.结果 PDD混合酶消化组分离的NSCs存活率高,增殖速度快;差速离心法和过筛法纯化NSCs的巢蛋白(nestin)阳性率均高于原代NSCs(59.14％ ±0.16％,P<0.05),过筛法的Nestin阳性率(93.54％ ±0.02％)高于差速离心法(86.12％ ±0.04％).结论 3种分离方法均能得到大量的NSCs,其中PDD酶消化法对NSCs的损伤小,神经球增殖速度快;过筛法得到的NSCs纯度更高.
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