【摘 要】
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建立基于SYBR GreenⅠ的real-time FQ-PCR方法检测并定量鸡外周血淋巴细胞（peripheral blood leukocytes,PBLs）中马立克病毒（Mareks disease virus,MDV）的载量（以meq基因为定量标准）,并将此技术的敏感性与标准PCR方法进行对比。应用PCR技术从MDV-1攻毒后的霞烟鸡PBLs中扩增MDVmeq基因的部分片段,纯化上述基因
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（30860206）； 湖南省自然科学基金资助项目（13JJ6055）； 湖南省教育厅一般资助项目（10C0717）； 湖南科技大学博士启动基金资助项目（E510C4）；
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建立基于SYBR GreenⅠ的real-time FQ-PCR方法检测并定量鸡外周血淋巴细胞（peripheral blood leukocytes,PBLs）中马立克病毒（Mareks disease virus,MDV）的载量（以meq基因为定量标准）,并将此技术的敏感性与标准PCR方法进行对比。应用PCR技术从MDV-1攻毒后的霞烟鸡PBLs中扩增MDVmeq基因的部分片段,纯化上述基因的DNA扩增产物,然后克隆到pGM-T载体,重组质粒通过PCR和EcoRⅠ酶切及测序分析进行确认;将浓度梯度的meq基因的重组标准品质粒DNA进行real-time FQ-PCR,建立其相应的标准曲线。同样以质粒DNA为模板,real-time FQ-PCR方法的最低检出率为10拷贝,而标准PCR的最低检出率则为32拷贝。结果表明,在检测MDV时,real-time FQ-PCR敏感度比标准PCR要高。
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