【摘 要】
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目的 观察肺特异性X蛋白(LUNX)转染表达对A549肺癌细胞株的增殖凋亡和生物学功能的影响.方法 应用慢病毒基因转染表达方法检测LUNX表达对A549肺癌细胞株的抗增殖作用和生物学
【机 构】
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450003,郑州大学人民医院(河南省人民医院)胸部肿瘤中心450003,郑州大学人民医院(河南省人民医院)肝胆胰外科;
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目的 观察肺特异性X蛋白(LUNX)转染表达对A549肺癌细胞株的增殖凋亡和生物学功能的影响.方法 应用慢病毒基因转染表达方法检测LUNX表达对A549肺癌细胞株的抗增殖作用和生物学功能的影响;通过免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测LUNX-小干扰RNA(siRNA)在A549肺癌株中的表达水平,Real-time PCR测定转染后A549肺癌细胞中增殖指标溴化脱氧尿嘧啶核苷(BrdUrd),碱性磷酸酶(AKP)和活性标志物表面活性蛋白C(SPC)的mRNA水平表达变化,并通过显微镜、苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜等观察凋亡细胞的形态学改变.结果 Real-time PCR和免疫细胞化学证实转染后A549肺癌细胞中有LUNX稳定表达;Real-time PCR结果示:A组AKP、SPC和BrdUrd密度为(0.73 ±0.14)、(0.53 ±0.12)、(0.31 ±0.10) U/L,B组为(1.64±0.38)、(1.47±0.25)、(1.28±0.21) U/L,C组为(1.71±0.45)、(1.53±0.32)、(1.33±0.26) U/L.与B、C对照组比较,A组AKP、SPC和BrdUrd扩增产物条带吸光度(A)值均显著降低(P＜0.01).噻唑蓝(MTT)比色法表明:随着LUNX-siRNA与A549肺癌细胞效靶比增加及作用时间延长,抑制率明显增强(P＜0.05).相同作用时间不同比例之间差异也均有统计学意义(P＜0.05),同一比例不同作用时间之间差异有统计学意义(P＜0.01).LUNX-siRNA作用于肺癌细胞48 h后,形态学观察肺癌细胞发生凋亡或坏死,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 体外制备的LUNX-siRNA对肺癌A549细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用,其可能是通过通过负性调控信号通路降低A549肺癌细胞株中AKP、SPC和BrdUrd的表达.
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