鸡IL-6、IL-17和IFN-γ实时荧光定量PCR检测方法的建立

来源 :南方农业学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pdiudiu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
[目的]建立针对鸡白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ)的实时荧光定量PCR检测方法,为细胞因子的定量检测及病毒致病机制的研究奠定基础.[方法]根据GenBank已发表的鸡IL-6、IL-17、IFN-γ和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因保守序列,设计并合成4对相应的特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组质粒,对退火温度、引物浓度等SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立各基因的标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性试验.[结果]GAPDH、IL-6、IL-17和IFN-γ的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增效率分别是98.2%、99.2%、102.0%和100.8%,相应的标准误差为0.00666、0.00813、0.00365和0.00458.特异性试验结果显示各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰,敏感性试验结果表明各基因的检测下限均为100拷贝,重复性试验结果表明组内变异系数均小于2.00%.[结论]建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、特异性强等特点,为快速检测和定量鸡源IL-6、IL-17和IFN-γ的表达水平提供了技术平台.
其他文献
临床护理实习带教工作是医院护理工作的重要组成部分.临床实习质量的好坏直接反映了一所医院综合技术水平和管理能力的高低.近年来,我们高度重视护生的临床实习带教工作,把护
为丰富华南稻区晚季水稻品种多样性, 广西农业科学院水稻研究所利用自选育软米型三系不育系龙丰A与自育强优势恢复系桂826进行配组, 成功育成弱感光型优质高产杂交水稻新组合
目的 由于重症急性胰腺炎病程迁延,常存在免疫和代谢功能紊乱,真菌感染成为突出临床问题. 方法 总结2003年5月-2008年12月收治的85例重症急性胰腺炎,并作真菌感染的菌谱调查.
随着人民生活水平的日益提高,患者对护理质量、护理安全提出了更高的要求.随着法律制度的健全和法律知识的普及教育,人民的法律观念和权利意识也逐渐增强,对医院的管理和护理
沟通是建立良好关系的桥梁,是一种与临床护理技术同样重要的人与人之间的交往技巧.良好恰当的语言及非语言交流能促进护患关系的建立,能取得患者的信任,从而获得与患者有关的
慢性阻塞性肺病合并Ⅱ型呼吸衰竭,是由于通气功能障碍造成缺氧和二氧化碳潴留,并可由此引起一系列危及病人生命的临床症状和体征,加上治疗时大量输入葡萄糖、应用肾上腺皮质
古人云:“师者,传道、授业、解惑也”.而传道、授业、解惑也存在一定的方法,不同的学科有着不同的教学方法.对于儿科护理学来说,其教学内容繁琐,涉及面广,所以教学难度较大.
为揭示小麦种子萌发和幼苗生长过程中抗氧化关键酶SOD、POD和CAT对Cr (Ⅵ)胁迫的生理响应机制, 以温麦6号为研究材料, 采用水培法研究不同浓度梯度 (3~45mg/L)重金属Cr (Ⅵ)胁
广西南宁市五塘镇是全国著名的苦瓜生产基地.该镇苦瓜种植以面积大、产量高、瓜质优而远销全国各地,素有“苦瓜之乡”的美誉.
静脉留置针又称套管针,作为一种先进的新型输液器材,已广泛应用于临床.癌症晚期患者病情复杂,变化快,静脉留置针的应用不仅能提高护士的工作效率,避免不必要的损伤,且能减轻