目的原代心肌细胞培养是一项重要的体外实验技术,为建造心血管疾病相关模型提供了重要的基础保障。文中旨在通过探讨不同消化时间对原代心肌细胞培养的影响,得到一套简便易行并且能获得较高成活率、纯度及活性的原代心肌细胞的培养方法。方法采用单消化酶多次消化心肌组织,根据消化时间分为8 min组和10 min组,差速贴壁法和5-溴-2-脱氧尿苷抑制法获得纯度较高的心肌细胞。光学显微镜下观察心肌细胞形态,记录镜下不同区域心肌细胞搏动频率测定细胞活力。用台盼蓝染色法检测培养细胞的存活率,横纹肌肌动蛋白鉴定心肌细胞。最后建立心肌细胞肥大模型,比较实验组(血管紧张素Ⅱ)和对照组[10%FBS DMEM(H+)培养基]的细胞截面平均面积。结果与8 min组比较,10 min组原代心肌细胞大部分伸出伪足相互接触交织成网,逐渐形成细胞簇,立体感明显,细胞搏动及收缩更为明显而有力。分离纯化后原代心肌细胞的平均存活率均>90%,10 min组平均存活率显著高于8 min组[(95.4±0.8)%vs(93.0±0.8)%,P<0.05]。α-actin免疫细胞化学染色鉴定,8 min组和10 min组原代心肌细胞的阳性率均>95%。血管紧张素Ⅱ作用48 h后,10 min组原代心肌细胞实验组心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、细胞截面平均面积较对照组表达均显著升高[(20.8±0.7)vs(15.8±0.5),(34.77±8.43)μm2vs(14.11±4.29)μm2,P<0.05],而消化时间为8 min的原心肌细胞截面平均面积和ANP值未见显著变化。结论采用消化时间为8 min的原代心肌细胞培养方法具有简便、省时、易操作等特点,最重要的是能够获得较高质量的心肌细胞。