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摘要：目的：研究枳椇子总黄酮的微波提取工艺。方法：以总黄酮为指标，采用正交试验法筛选最佳工艺条件。结果：优化的最佳工艺条件为：微波功率300W、乙醇浓度50％、10倍量溶剂、辐射时间20min。结论：微波提取技术能够快速高效的提取枳椇子总黄酮。
关键词：枳椇子 黄酮 微波提取
枳椇子，为鼠李科植物枳椇的干燥成熟带肉质果柄的果实或种子[1]，自古以来就是一味解酒良药，素有“千杯不醉枳椇子”之说。历代医书对其解酒的叙述各异[2]，例如《新修本草》与《千金翼方》中为“以其木为屋，屋中酒则味薄”；《本草纲目》中为“枳椇消酒积”等。该药材在《中华人民共和国卫生部药品标准-中药材》中也有收载[3]，功效为止渴除烦、清湿热，解酒毒，用于酒精中毒、烦渴呕逆、二便不利等症。目前的文献资料表明总黄酮可能是其有效部位[4]，故本文以總黄酮含量为指标，考察了微波法提取枳椇子总黄酮的影响因素，为寻求其最佳微波提取工艺提供依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 BS-223S分析天平(Sartorius) ，XH-100A微波萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司），FWZ UV-2000紫外可见分光光度计(龙尼柯（上海）仪器有限公司)。
1.2 材料 枳椇子：购于宜春市，经鉴定为鼠李科植物枳椇的干燥种子；芦丁对照品（中国生物制品鉴定所）；无水乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠均为分析纯
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁对照品0.1250g，置250ml量瓶中，加30%乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得（0.50mg/ml）。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密量取样品溶液2.0ml，置于25 ml量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.7ml。摇匀后放置6min，加10%硝酸铝溶液0.7ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液5ml，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，显色l0min，即得。
2.2 吸收波长的测定 精密量取芦丁对照品溶液1.00ml，按2.1.2项下的方法显色后， 在350nm～650nm进行波长扫描，结果见图1。可以看出，在500nm处有最大吸收，故选择500nm处测定波长。
2.3 标准曲线的建立 精密量取芦丁对照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml分别置于25ml量瓶中，按2.1.2项下方法显色，以相应试剂为空白，于500nm处测定吸光度。以浓度（μg/ml)为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：A=0.0101A+0.0251（r=0.9996），芦丁浓度在20~70μg/ml之间时与吸光度有良好的线性关系。实验精密度、重现性实验RSD均小于2.0%，符合方法学要求。
2.4 回收率实验 精密量取正交试验表中的5号样品溶液2.0ml（共5份），置25ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液1.5ml，按2.1.2项下方法显色并测定它们的吸光度，计算回收率，结果回收率在95.2%～104.1%之间，RSD小于3％，表明重现性好，方法可行。
2.5 正交试验与结果
2.5.1 提取工艺 取枳椇子于烘箱中60℃干燥24h，粉碎，取20～40目粗颗粒10g置微波萃取仪配套的三口烧瓶中，加入溶剂，浸泡15min后放入微波萃取仪中（温度设定75℃），按正交表中的条件（见表1）提取2次，滤过，合并滤液，残渣用适量溶剂洗涤3次，最后并入250ml量瓶中，定容。按照前述方法进行含量测定，结果见表2与表3。
注：F0.05(2，2)＝19.0，F0.01(2，2)＝99.0
2.5.2 结果与分析 由表3直观分析可知：各因素作用主次为C＞A＞B＞D，且以A2 B3 C3 D3为最佳，即功率为300W，乙醇浓度为50％，料液比为10，辐射时间为20min。
方差分析中，由于D因素对提取影响极小，故将其列为误差列。从表3可以看出，C因素的改变对总黄酮的提取效率有非常显著性影响，A因素的改变对总黄酮的提取有显著性影响。结论与前面的直观分析相同。
2.5.3 正交试验验证 按照正交试验优化的工艺进行提取，测定总黄酮含量，结果2次验证的结果分别为1.49％、1.43％，优于正交试验表中的各次试验。
3 结论与讨论
通过正交试验对枳椇子总黄酮的微波提取工艺进行了研究，结果表明最佳提取工艺为微波功率为300W，乙醇浓度为50％，料液比为10，辐射时间为20min。采用文献报道的回流法[5]对枳椇子中总黄酮含量进行了测定，所测结果为1.44％，与微波提取法所测结果接近，但耗时较长，故微波法在缩短提取时间、提高提取效率等方面具有较大优势。
参考文献：
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(精选本)[M].上海科学技术出版社，1996:1140.
[2]陈绍红.枳椇子解酒的文献整理和药效学研究[D].北京中医药大学，2003，23.
[3]中华人民共和国卫生部.卫生部颁药品标准(中药材第一册)[D]，1996，63.
[4]张洪，叶丽萍，张如洪，等. 枳椇子有效部位的初步研究[J].广东药学院学报，2003，19(2):111.
[5]文为，张洪，曾嵘，等.枳椇子总黄酮提取工艺的优化[J].医药导报，2008，27(1):77.
关键词：枳椇子 黄酮 微波提取
枳椇子，为鼠李科植物枳椇的干燥成熟带肉质果柄的果实或种子[1]，自古以来就是一味解酒良药，素有“千杯不醉枳椇子”之说。历代医书对其解酒的叙述各异[2]，例如《新修本草》与《千金翼方》中为“以其木为屋，屋中酒则味薄”；《本草纲目》中为“枳椇消酒积”等。该药材在《中华人民共和国卫生部药品标准-中药材》中也有收载[3]，功效为止渴除烦、清湿热，解酒毒，用于酒精中毒、烦渴呕逆、二便不利等症。目前的文献资料表明总黄酮可能是其有效部位[4]，故本文以總黄酮含量为指标，考察了微波法提取枳椇子总黄酮的影响因素，为寻求其最佳微波提取工艺提供依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 BS-223S分析天平(Sartorius) ，XH-100A微波萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司），FWZ UV-2000紫外可见分光光度计(龙尼柯（上海）仪器有限公司)。
1.2 材料 枳椇子：购于宜春市，经鉴定为鼠李科植物枳椇的干燥种子；芦丁对照品（中国生物制品鉴定所）；无水乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠均为分析纯
2 方法与结果
2.1 溶液的配制
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁对照品0.1250g，置250ml量瓶中，加30%乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得（0.50mg/ml）。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密量取样品溶液2.0ml，置于25 ml量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.7ml。摇匀后放置6min，加10%硝酸铝溶液0.7ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液5ml，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀，显色l0min，即得。
2.2 吸收波长的测定 精密量取芦丁对照品溶液1.00ml，按2.1.2项下的方法显色后， 在350nm～650nm进行波长扫描，结果见图1。可以看出，在500nm处有最大吸收，故选择500nm处测定波长。
2.3 标准曲线的建立 精密量取芦丁对照品溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml分别置于25ml量瓶中，按2.1.2项下方法显色，以相应试剂为空白，于500nm处测定吸光度。以浓度（μg/ml)为横坐标，吸收度为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为：A=0.0101A+0.0251（r=0.9996），芦丁浓度在20~70μg/ml之间时与吸光度有良好的线性关系。实验精密度、重现性实验RSD均小于2.0%，符合方法学要求。
2.4 回收率实验 精密量取正交试验表中的5号样品溶液2.0ml（共5份），置25ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液1.5ml，按2.1.2项下方法显色并测定它们的吸光度，计算回收率，结果回收率在95.2%～104.1%之间，RSD小于3％，表明重现性好，方法可行。
2.5 正交试验与结果
2.5.1 提取工艺 取枳椇子于烘箱中60℃干燥24h，粉碎，取20～40目粗颗粒10g置微波萃取仪配套的三口烧瓶中，加入溶剂，浸泡15min后放入微波萃取仪中（温度设定75℃），按正交表中的条件（见表1）提取2次，滤过，合并滤液，残渣用适量溶剂洗涤3次，最后并入250ml量瓶中，定容。按照前述方法进行含量测定，结果见表2与表3。
注：F0.05(2，2)＝19.0，F0.01(2，2)＝99.0
2.5.2 结果与分析 由表3直观分析可知：各因素作用主次为C＞A＞B＞D，且以A2 B3 C3 D3为最佳，即功率为300W，乙醇浓度为50％，料液比为10，辐射时间为20min。
方差分析中，由于D因素对提取影响极小，故将其列为误差列。从表3可以看出，C因素的改变对总黄酮的提取效率有非常显著性影响，A因素的改变对总黄酮的提取有显著性影响。结论与前面的直观分析相同。
2.5.3 正交试验验证 按照正交试验优化的工艺进行提取，测定总黄酮含量，结果2次验证的结果分别为1.49％、1.43％，优于正交试验表中的各次试验。
3 结论与讨论
通过正交试验对枳椇子总黄酮的微波提取工艺进行了研究，结果表明最佳提取工艺为微波功率为300W，乙醇浓度为50％，料液比为10，辐射时间为20min。采用文献报道的回流法[5]对枳椇子中总黄酮含量进行了测定，所测结果为1.44％，与微波提取法所测结果接近，但耗时较长，故微波法在缩短提取时间、提高提取效率等方面具有较大优势。
参考文献：
[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(精选本)[M].上海科学技术出版社，1996:1140.
[2]陈绍红.枳椇子解酒的文献整理和药效学研究[D].北京中医药大学，2003，23.
[3]中华人民共和国卫生部.卫生部颁药品标准(中药材第一册)[D]，1996，63.
[4]张洪，叶丽萍，张如洪，等. 枳椇子有效部位的初步研究[J].广东药学院学报，2003，19(2):111.
[5]文为，张洪，曾嵘，等.枳椇子总黄酮提取工艺的优化[J].医药导报，2008，27(1):77.