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目的
建立人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)16型E7蛋白的原核表达系统，表达HPV16 E7蛋白，制备小鼠抗HPV16 E7血清。
方法采用PCR方法扩增HPV16 E7基因，构建入pET21b质粒，重组表达载体经鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。诱导表达后经十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate，SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE)和Western blot鉴定表达产物。提取包涵体进行变性复性处理后纯化，纯化后的可溶性蛋白免疫Balb/C小鼠，检测小鼠体内γ-干扰素(interferon-γ，IFN-γ)水平、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化。
结果PCR扩增片段为0.3 Kb，酶切和序列测定证实重组质粒构建正确。SDS-PAGE在11 KD处出现蛋白条带。蛋白表达以包涵体为主。免疫后小鼠抗体效价升高，CD4/CD8比值无升高，IFN-γ无反应。
结论成功制备可溶性HPV16E7蛋白和小鼠抗HPV16E7高效价抗血清。