【摘 要】
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建立多重PCR反应结合基因芯片技术的11种(株)食源性致病菌检测方法。以金黄色葡萄球菌、志贺菌、霍乱弧菌、单增李斯特菌等11种(株)食源性细菌的特异性基因为靶基因,利用Prem
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
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建立多重PCR反应结合基因芯片技术的11种(株)食源性致病菌检测方法。以金黄色葡萄球菌、志贺菌、霍乱弧菌、单增李斯特菌等11种(株)食源性细菌的特异性基因为靶基因,利用Premier 5.0和Oligo 6.0软件设计引物和探针,BLAST比对分析特异性。寡核苷酸探针点制醛基玻片制备基因芯片,13对引物分为3组扩增,PCR产物混合后与基因芯片杂交检测。鼠伤寒沙门菌、产气荚膜梭菌、奇异变形杆菌等11种(株)细菌使用该方法检测均能准确鉴定,基因组DNA灵敏度为10-100 pg,6组模拟DNA混合样本芯片检测结果与预期一致,18株沙门菌临床分离株检测均为阳性。从样本PCR扩增开始至检测完成,整个操作时间不超过3 h。该方法能够对11种(株)食源性致病菌快速准确鉴定,可以满足部分食源性致病菌通量检测的要求,具有较好的临床应用前景。
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