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目的
建立血清非甲基化胰岛素DNA的检测方法，并初步评价其临床应用价值。
方法对文献报道的Akirav法和Husseiny法反应体系进行验证和改良。同时选取2014年2月至2015年2月中南大学湘雅二医院门诊或病房诊断为1型糖尿病(T1DM)且病程1年以内的患者6例，以及年龄相匹配的健康对照8例，采用改良Akirav法检测其血清中非甲基化胰岛素DNA水平，初步评价临床应用价值。本研究方案经中南大学湘雅二医院伦理委员会批准[(2012)伦理审第(S12)号]。
结果Akirav法的甲基化非依赖性PCR(MIP)反应特异性较差，无法获得目标产物；Husseiny法的甲基化特异性定量PCR(qMSP)引物扩增效率为(76.98±2.88)%，低于推荐的80%，结果可信度差。利用Akirav法的主要思路，结合Husseiny法中提供的引物，建立的改良Akirav法灵敏度较高，检测T1DM患者血清中的非甲基化胰岛素DNA水平高于正常对照[非甲基化指数(DI)分别为0.039(0.028～0.083)和0.016(0.003～0.029)，P＝0.005]。
结论改良Akirav法能有效检测血清非甲基化胰岛素DNA水平，T1DM患者血清中非甲基化胰岛素DNA水平高于健康人。