【摘 要】
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将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体.并将其电转化入毕赤酵母GS115中.通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子.重组细胞经过120 h培养
【机 构】
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浙江大学生物系统工程与食品科学学院,山东省农业科学院,山东省药学科学院,浙江大学生命科学学院,浙江工业大学生物与环境工程学院
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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将编码南极假丝酵母脂肪酶A的基因进行克隆,与pPIC9K连接构建成重组载体.并将其电转化入毕赤酵母GS115中.通过MD和MM平板及PCR扩增,筛选和鉴定重组子.重组细胞经过120 h培养后.发酵液上清酶活达到13 U/mL.聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,重组脂肪酶分子量约为50 kD.比原始脂肪酶略大.粗酶液经中空纤维素膜超滤浓缩、硫酸铵分级沉淀和离子柱交换层析后.得到在SDS-PAGE上显示为单一条带的重组脂肪酶.该酶最适反应温度为75 ℃,在70℃保持30 min后,仍具90%以上的活性,最适反应pH值为7.0,在pH6.0～8.0的范围内,具有一定的稳定性.
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