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目的
原核表达EV-D68结构蛋白VP1，并对其抗原性进行评价。
方法以肠道病毒68型P1基因为模板，设计引物扩增出目的片段VP1，将其连接至大肠杆菌表达载体pGEX-5X-1上。将重组表达载体pGEX-5X-1-VP1转化大肠杆菌表达菌株Rosetta (DE3)pLysS，对该工程菌进行诱导表达。菌体裂解后用SDS-PAGE电泳、Western-blot鉴定融合蛋白；对表达菌体进行超声破碎和亲和层析纯化；使用酶联免疫吸附试验方法评估目的蛋白与不同种属EV-D68阳性血清的结合能力及亲和力。
结果成功构建融合表达载体pGEX-5X-1-VP1，经过双酶切及测序鉴定均正确；成功表达和纯化出EV-D68 (Enterovirus D68, EV-D68) VP1融合蛋白，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，得到与预期蛋白相对分子质量为61 000大小一致的目的条带；纯化蛋白与不同种属的阳性血清可以特异性结合，与兔血清、恒河猴血清、小鼠血清的亲和力常数分别为1.6×106、3.9×105、3.1×106。
结论成功表达了EV-D68 VP1融合蛋白，为研究EV-D68 VP1蛋白的结构、功能及中和抗体筛选奠定基础。