【摘 要】
：
目的 构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因及其突变体原核表达系统,了解突变前后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法 采用高保真PCR和T-A克隆法
【机 构】
：
杭州,浙江大学附属第一医院卫生部传染病重点实验室
论文部分内容阅读
目的 构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因及其突变体原核表达系统,了解突变前后重组表达产物的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长活性的变化.方法 采用高保真PCR和T-A克隆法,从金黄葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增并克隆了不含信号肽序列的sea基因.采用突变引物PCR构建sea基因定位突变体.建立sea基因及其定位突变体原核表达系统.Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白.采用TCID50法测定目的重组蛋白对Vero细胞的细胞毒性.采用MTT比色法分别检测不同浓度的目的重组蛋白促小鼠脾细胞增殖及对抑制KB和HL-60癌细胞株生长的作用.结果 所克隆的sea基因核苷酸序列与报道序列的相似性为100%,7种突变体均在既定位置获得预期的密码子突变.rSEA和各突变体重组蛋白表达量约为细菌总蛋白的52%.rSEA对Vero细胞TCID50为4.1μg,其突变体重组蛋白分别为5.8～23.5μg.1和5μg/ml的rSEA及其5种突变体重组蛋白rSEA/H187A、rSEA/H225A、rSEA/D227A、rSEA/H187A/D227A和rSEA/H225A/D227A对小鼠脾细胞均有明显的促增殖作用(P＜0.05),10和20μg/ml的rSEA及上述5种突变体重组蛋白促小鼠脾细胞增殖活性与100μg/ml PHA相似(P＞0.05).5～20μg/ml的rSEA及上述5种突变体重组蛋白作用的小鼠脾细胞上清及其上清与脾细胞混合物均能有效地抑制KB和HL-60细胞生长(P＜0.05).结论 本研究成功地构建了sea基因突变体及其高效原核表达系统,其表达产物的细胞毒性均有所降低.由于rSEA/H225A、rSEA/D227A、rSEA/H225A/D227A细胞毒性较低、促脾细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长活性较强,可作为研制升白细胞、抗肿瘤SEA相关药物的候选突变体.
其他文献
总体规划从前期测量，到现场调研和资料收集，再到规划编制，直至最后的评审，过程比较长，本次只就测量，规划编制过程中的具体问题举例说明，谈目前状况下有待改进的编制方法。
主干道往往地处城市的重要地段，尤其是集交通性与生活性于一体的综合性主干道，自然成为展示城市形象的重要区域。特别是对于规模较小、介于城与乡之间的小城镇，其重要主干道路的
天津五大道地区和意式风情区均是天津近代城市建设的见证者。它们既拥有异国建筑，又拥有历史街区，有着相似点也有不同处。通过实地调查，我们分析总结两个了区域的建筑风格、改造
文章创新性地提出了采用精密分流器和示波器校准模拟量输出的电子式互感器的比值差和相位差。在工频下分别用测差法和直测法校准了其比值差和相位差，两种方法的测量结果吻合；在
从目前中国生态城市建设和城市规划发展所面临的严重困境出发，结合目前全球范围内正在发生的新工业革命和大数据云计算等重大变革，讨论了中国城市在走向生态文明的过程中所要面
目的 主要研究丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号途径在内毒素脂多糖(LPS)诱导大鼠施万细胞(Scs)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达和一氧化氮(NO)产生中的作用.方法 先用3种MAPK
目的 评价三维对比动态增强磁共振血管成像(3D DCE MRA)在诊断Budd-Chiari综合征(BCS)中的价值.方法 8例BCS术前接受了常规MRI和3D DCE MRA检查,着重于回顾性分析其3D DCE MR
目的:比较舒芬太尼(sufentanil)病人静脉自控镇痛(PCIA)与硬膜外自控镇痛(PCEA)用于骨科下肢手术后的镇痛、镇静效果及副作用的差异.方法:60例ASA Ⅰ～Ⅲ级择期行骨科下肢手术
随着围产医学技术的进步,早产儿成活率大大提高,而由此所致的早产儿视网膜病变(ROP)发病率、致盲率也有了显著增高.
目的探讨 K-Cl 协同转运子1(KCC1)在宫颈癌组织中的表达及在宫颈癌发生、发展中的作用。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western 印迹及免疫荧光染色方法测定40