含人神经营养素-3的重组腺病毒的高效制备

来源 :听力学及言语疾病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shuang9988
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目的 采用改良的细菌内同源重组法快速高效构建含人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)的重组腺病毒,为其用于神经性聋的在体研究做准备。方法 将人全长NT-3基因亚克隆至带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的穿梭质粒pshuttle-IRES-hrGFP-1上,用电穿孔法使线性化的重组穿梭质粒与预转入腺病毒骨架pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183-AD-1同源重组,脂质体法转染AD293细胞并大量扩增、柱层析纯化得到重组腺病毒pAdeasy-NT
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