【摘 要】
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目的 分析结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,Mtb)Rv2673基因过表达对分枝杆菌细胞壁组分的影响. 方法 构建Rv2673在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中的表
【机 构】
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大连医科大学基础医学院,辽宁大连,116044
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目的 分析结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis,Mtb)Rv2673基因过表达对分枝杆菌细胞壁组分的影响. 方法 构建Rv2673在耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msm)中的表达载体,导入到Msm后提取膜蛋白,以抗组胺酸标签的单克隆抗体鉴定表达的Rv2673蛋白.细菌培养时加入14C-葡萄糖,收获Msm后分别以氯仿∶甲醇(2∶1)、氯仿∶甲醇∶水(10∶10∶3)、ε-soak-lovolunnee试剂分步提取全细胞的细胞壁组分,其余的沉淀则用以提取LAM.以HP-TLC及SDS-PAGE方法分离提取的组分,放射自显影. 结果 生物信息学分析表明Rv2673蛋白为在羧基末端具有8次跨膜结构的膜蛋白;Western bloting方法检测到过表达Rv2673的菌株膜蛋白中具有表达的Rv2673蛋白.TLC方法对细胞壁组分的分步分析表明过表达Rv2673的菌株及其对照菌株间DPA、DPM、Ac2PIM2、AcPIM2和Ac2PIM4/AcPIM4等小分子脂溶性分子没有显著性差异,但Western blot分析的细胞壁中大分子脂类组分显示,Rv2673具有显著性促进Ac2PIM6和AcPIM6生成的作用,以及促进LM转变为LAM.推测Rv2673蛋白能促进大分子脂类分子的生物合成,但对细胞壁中小分子的脂类分子无显著影响. 结论 Rv2673参与LAM中阿拉伯聚糖分枝结构的形成,推测Rv2673蛋白对细菌感染宿主细胞及/或宿主细胞杀死Mtb有一定影响,是有发展潜力的药物靶向分子.
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