【摘 要】
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目的构建编码华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的原核表达载体,并分析其在大肠埃希菌中的表达.方法用Trizol法从华支睾吸虫3-成虫体内提取总RNA,并将其反转录成cDNA.根据华支
【基金项目】
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广东省自然科学基金，广东省科技厅科技计划，广东省广州市科技攻关项目
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目的构建编码华支睾吸虫3-磷酸甘油酸激酶基因的原核表达载体,并分析其在大肠埃希菌中的表达.方法用Trizol法从华支睾吸虫3-成虫体内提取总RNA,并将其反转录成cDNA.根据华支睾吸虫磷酸甘油酸激酶的已知基因,利用DNAclub和PCRdesign软件设计合成一对特异引物,从合成的cDNA中,用PCR技术扩增出目的片段.将目的片段和原核表达载体同时双酶切后连接,重组体转入JM109大肠埃希菌,用双酶切、PCR和测序筛选阳性克隆.挑选1个阳性菌落,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,表达产物进行十二烷
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