论文部分内容阅读
目的 观察CD160胞外段(即可溶性CD160分子)对荷瘤小鼠CD4+T淋巴细胞的活性和免疫功能的影响.方法 构建小鼠CD160分子胞外段(sCD160)的重组表达载体psCD160,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,Western blot检测培养上清中的sCD160水平.建立TC-1宫颈癌细胞荷瘤小鼠模型,流式细胞术(FCM)检测CD160在脾CD4+T细胞上的表达;免疫磁珠分选荷瘤3周小鼠脾CD4+T细胞,与负载肿瘤细胞抗原肽复合物的树突状细胞(DC)共培养6d,FCM检测CD4+T细胞上CD160的表达.负载抗原肽复合物的DC分别在转染pcDNA3.1或psCD160的CHO培养上清中孵育18h后,与分选的CD4+T细胞共培养6d,羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记法检测CD4+T细胞增殖,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养上清中白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)的浓度.结果 转染psCD160的CHO细胞表达并分泌可溶性CD160分子.荷瘤3周小鼠CD4+T细胞上CD160分子的阳性率与对照组比较差异无统计学意义[(5.288±2.723)％比(3.213±1.461)％,P＞0.05],在体外被负载特异性抗原肽复合物的DC再活化后,其CD160阳性率显著增高达(17.590±7.287)％(P＜0.05).与未经sCD160作用的DC组相比,经sCD160封闭的负载特异性抗原肽复合物的DC再活化的CD4+T细胞中增殖细胞百分数[(17.980 ±5.337)％比(12.610 ±4.431)％,P＜0.05]、上清中的IL-2和IFN-γ浓度[(383.9±83.67) ng/L比(237.5±54.64) ng/L,(730.8±135.8) ng/L比(451.9±149.5) ng/L,P＜0.05]均显著升高.结论 肿瘤特异性CD4+T细胞在体外再活化后CD160的表达升高,可溶性CD160阻断其作用可有效增强CD4+T细胞增殖和细胞因子分泌的活性.