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碱性橙是一种偶氮类碱性工业染料，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色，已经被认定是一种可以使人致癌的物质，不得用于与人体长期直接接触的纺织和服装产品中。一些不法商贩为了增加食品的色泽光亮，以次充好， 在鲜海鱼、豆制品、腐竹、饮料等食品中使用碱性橙染色， 使消费者的身体健康受到了严重威胁。
碱性橙染料的种类主要有碱性橙21、碱性橙2和碱性橙22等3种，本方法采用高效液相色谱法，在GB/T 23496-2009的基础上，对色谱条件进行试验改进，建立一套更加快速、准确测定食品中非食用色素碱性橙含量的方法。
试验部分
试剂与溶液。除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682中一级水要求。
液体样品：饮料；
甲醇，色谱纯；
乙腈，色谱纯；
20mmol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵溶于1000 mL水中；
定容液：取65mL甲醇加入35mL 20 mmol/L乙酸铵溶液中，混匀；
标准品：碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，纯度≥95 %；
1.0mg/mL 堿性橙染料标准储备溶液：分别称取100mg（精确至0.1mg）碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，置于100mL容量瓶中，加无水甲醇溶解并定容至刻度，混匀，该溶液在4 ℃条件下避光保存，有效期为1个月；
0.1mg/mL碱性橙染料标准溶液：准确移取10 mL碱性橙染料标准储备溶液于100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀。
分别移取碱性橙染料标准溶液5.00mL、10.00mL、20.00mL于100 mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀，分别相当于5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL浓度标准溶液。
仪器与设备。高效液相色谱，附有紫外检测器；天平：感量0.0001g和0.01g；超声波清洗仪；涡旋振荡器；电热板。
试验方法
将样品混匀，称取20g（精确至0.01g）样品于100mL烧杯中，电热板上加热挥发至近干，用定容液溶解转移到刻度试管中并定容至25mL，经0.45μm滤膜过滤后待进样。
高效液相色谱测定
色谱条件。
色谱柱：C18（4.6mm×250mm，5μm）；
流动相：甲醇+20mmol/L乙酸铵；
流速：1.0mL/min；
梯度洗脫程序参见表1；
柱温：30 ℃；
检测波长：449nm；
进样量：20μL。
标准曲线绘制。
用配制的碱性橙染料标准工作液绘制以峰面积为纵坐标、工作溶液浓度为横坐标的标准工作曲线。
结果计算
试样中每种碱性橙染料的含量按下式分别计算：
X=
式中：
X——试样中每种碱性橙染料的含量（mg/kg）；
c——由标准曲线查出的试样液中每种碱性橙染料的浓度（μg/mL）；
V——样品最终定容体积（mL）；
m——试样的质量（g）。
计算结果保留小数点后一位数字。
结果与讨论
标准谱图。如图1。
干扰试验。在色谱条件下，食品中的添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠、咖啡因在449 nm 处几乎无吸收， 不会干扰碱性橙的测定。
线性关系及检出限。按试验方法对碱性橙2 、碱性橙21 、碱性橙22等3 种碱性橙混合标准溶液系列进行测定，均在5.0～20.0 μg/mL范围内与峰面积呈线性关系， 线性回归方程、相关系数及检出限（3S/N）见表2。
回收试验及精密度。按试验方法对样品做加标回收试验， 结果见表3。
作者简介：
李文辉（1971-），男，广东梅县人，工程师，研究方向：食品检验。
碱性橙染料的种类主要有碱性橙21、碱性橙2和碱性橙22等3种，本方法采用高效液相色谱法，在GB/T 23496-2009的基础上，对色谱条件进行试验改进，建立一套更加快速、准确测定食品中非食用色素碱性橙含量的方法。
试验部分
试剂与溶液。除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682中一级水要求。
液体样品：饮料；
甲醇，色谱纯；
乙腈，色谱纯；
20mmol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵溶于1000 mL水中；
定容液：取65mL甲醇加入35mL 20 mmol/L乙酸铵溶液中，混匀；
标准品：碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，纯度≥95 %；
1.0mg/mL 堿性橙染料标准储备溶液：分别称取100mg（精确至0.1mg）碱性橙2、碱性橙21、碱性橙22，置于100mL容量瓶中，加无水甲醇溶解并定容至刻度，混匀，该溶液在4 ℃条件下避光保存，有效期为1个月；
0.1mg/mL碱性橙染料标准溶液：准确移取10 mL碱性橙染料标准储备溶液于100mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀。
分别移取碱性橙染料标准溶液5.00mL、10.00mL、20.00mL于100 mL容量瓶中，用定容液定容至刻度，混匀，分别相当于5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL浓度标准溶液。
仪器与设备。高效液相色谱，附有紫外检测器；天平：感量0.0001g和0.01g；超声波清洗仪；涡旋振荡器；电热板。
试验方法
将样品混匀，称取20g（精确至0.01g）样品于100mL烧杯中，电热板上加热挥发至近干，用定容液溶解转移到刻度试管中并定容至25mL，经0.45μm滤膜过滤后待进样。
高效液相色谱测定
色谱条件。
色谱柱：C18（4.6mm×250mm，5μm）；
流动相：甲醇+20mmol/L乙酸铵；
流速：1.0mL/min；
梯度洗脫程序参见表1；
柱温：30 ℃；
检测波长：449nm；
进样量：20μL。
标准曲线绘制。
用配制的碱性橙染料标准工作液绘制以峰面积为纵坐标、工作溶液浓度为横坐标的标准工作曲线。
结果计算
试样中每种碱性橙染料的含量按下式分别计算：
X=
式中：
X——试样中每种碱性橙染料的含量（mg/kg）；
c——由标准曲线查出的试样液中每种碱性橙染料的浓度（μg/mL）；
V——样品最终定容体积（mL）；
m——试样的质量（g）。
计算结果保留小数点后一位数字。
结果与讨论
标准谱图。如图1。
干扰试验。在色谱条件下，食品中的添加剂苯甲酸、山梨酸、糖精钠、咖啡因在449 nm 处几乎无吸收， 不会干扰碱性橙的测定。
线性关系及检出限。按试验方法对碱性橙2 、碱性橙21 、碱性橙22等3 种碱性橙混合标准溶液系列进行测定，均在5.0～20.0 μg/mL范围内与峰面积呈线性关系， 线性回归方程、相关系数及检出限（3S/N）见表2。
回收试验及精密度。按试验方法对样品做加标回收试验， 结果见表3。
作者简介：
李文辉（1971-），男，广东梅县人，工程师，研究方向：食品检验。