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摘要:介紹了林木组织培养培快速繁殖中微体扦插增殖途径、器官发生途径、体细胞发生途径及各个途径适用范围、优缺点、激素添加等情况,以为林木组织培养培快速繁殖苗木提供借鉴。
关键词: 组培快繁;微体扦插;体细胞
【分类号】:S67
在林木组织培养中,按照植物细胞全能型理论不同的外植体经过人工诱导,都能够重新开始细胞分裂和器官分化,最终形成完整的植株,这种经过离体培养的外植体重新形成完整的植株由于不同的植物种类、不同的外植体类型、培养基中激素不同、培养条件不同等在林业科研和生产中一般有几种组培扩繁的方法,即微体扦插增殖途径、器官发生途径、体细胞发生途径。
1 微体扦插途径
将外植体剪成带1~2枚叶片的单芽或多芽茎段,接种到伸长培养基上。一定时间后腋芽萌发形成嫩梢,再将此嫩梢剪成单芽或多芽茎段,进行伸长培养,如此多带继代培养、扦插,直到一定产量后,再进行生根培养,即可获得完整的植株;也可以一边扦插继代,一边生根培养。培养过程中培养基中一般只需添加NAA等生长素不而细胞分裂素不是必须的。这种方法主要适用于一些增殖培养困难,顶端优势明显或生长迅速,或对组培苗质量要求较高的木本植物,特别适合引种数量少,需要保存这个种质资源,优点:该方法一次成苗,培养过程简单,适用范围广,移栽容易成活,遗传性状稳定。缺点是繁殖初期速度较慢。需要注意的是外植体木质化的部位不宜选取。
2 器官发生途径
器官发生是指在离体条件下,先将外植体诱导产生愈伤组织,经过愈伤组织的增殖培养,不定芽诱导培养、生根培养,最后形成完整的植株。培养过程中培养基中的激素的添加比较复杂,愈伤组织诱导一般添加6-BA与NAA或2,4-D,诱导芽阶段细胞分裂素则需要较高的水平,该方法在培养过程中脱分化形成大量的愈伤组织,,可以在短期内在分化出大量的小植株,繁殖系数很高,但通过这种方法再生的植株在遗传上的稳定性较差,而且随着继代次数的增加,愈伤组织再生植株能力下降,甚至完全消失。
3 体细胞胚胎发生途径
体细胞胚胎发生是指双倍体或单倍体的体细胞(非合子细胞)在特定条件下,未经过性细胞融合而通过与合子胚胎发生类似的途径发育出新个体的形态发生途径。在林木组织培养中,可利用植物叶片、子房、花药、未成熟胚诱导体细胞发生,最后发育为完整的小植株。该途径形成的胚状体具有数量多,结构完整、繁殖速度快的特点,在该发生途径中非常重要的因子是培养基中的生长调节物质和含氮化合物,特别是生长素常用的生长素是2,4-D,NH4+ 对胚状体的形成起作用,因此培养基中常常添加水解酪蛋白、谷氨酰胺等,在林木组培扩繁中有五针松、挪威云杉、落叶松等针叶树用该方法的报道,在很多文献中报道ABA对体细胞的成熟影响巨大,一般用来抑制胚的早熟萌发,在许多植物的组织培养中都有关于Ag+影响体细胞胚胎发生的报道,Ag+对体细胞胚胎发生的作用在被子植物和裸子植物中可能具有体细胞胚的数量显著增加的相似的效果但总体来说,能诱导的林木种类还不多,发生机理尚不清楚。
参考文献:
[1]崔凯荣,陈克明,王晓哲,等植物体细胞胚胎发生研究的某些现状[J]. 植物学通报, 1993.10(3):14~20
[2]王雪婧,罗建勋.石大兴林木体细胞胚胎发生的研究进展[J].四川林业科技 2007(2)
[3]崔凯荣,戴若兰.植物体细胞胚发生的分子生物学[D].北京:科学出版社,2000.
[4]郭勇,崔堂兵,谢秀祯.植物细胞培养技术与应用[D].北京:化学工业出版社, 2004
[5]黄学林.李故菊.高等植物组织离体培养的形态建成及其调控[D].北京 :中国科学出版社.1995.150~251
作者简介:郭力宏(1968-),女,黑龙江哈尔滨人,在读生态学博士,工程师,主要从事城市园林绿化及珍惜濒危植物引种驯化的研究。
关键词: 组培快繁;微体扦插;体细胞
【分类号】:S67
在林木组织培养中,按照植物细胞全能型理论不同的外植体经过人工诱导,都能够重新开始细胞分裂和器官分化,最终形成完整的植株,这种经过离体培养的外植体重新形成完整的植株由于不同的植物种类、不同的外植体类型、培养基中激素不同、培养条件不同等在林业科研和生产中一般有几种组培扩繁的方法,即微体扦插增殖途径、器官发生途径、体细胞发生途径。
1 微体扦插途径
将外植体剪成带1~2枚叶片的单芽或多芽茎段,接种到伸长培养基上。一定时间后腋芽萌发形成嫩梢,再将此嫩梢剪成单芽或多芽茎段,进行伸长培养,如此多带继代培养、扦插,直到一定产量后,再进行生根培养,即可获得完整的植株;也可以一边扦插继代,一边生根培养。培养过程中培养基中一般只需添加NAA等生长素不而细胞分裂素不是必须的。这种方法主要适用于一些增殖培养困难,顶端优势明显或生长迅速,或对组培苗质量要求较高的木本植物,特别适合引种数量少,需要保存这个种质资源,优点:该方法一次成苗,培养过程简单,适用范围广,移栽容易成活,遗传性状稳定。缺点是繁殖初期速度较慢。需要注意的是外植体木质化的部位不宜选取。
2 器官发生途径
器官发生是指在离体条件下,先将外植体诱导产生愈伤组织,经过愈伤组织的增殖培养,不定芽诱导培养、生根培养,最后形成完整的植株。培养过程中培养基中的激素的添加比较复杂,愈伤组织诱导一般添加6-BA与NAA或2,4-D,诱导芽阶段细胞分裂素则需要较高的水平,该方法在培养过程中脱分化形成大量的愈伤组织,,可以在短期内在分化出大量的小植株,繁殖系数很高,但通过这种方法再生的植株在遗传上的稳定性较差,而且随着继代次数的增加,愈伤组织再生植株能力下降,甚至完全消失。
3 体细胞胚胎发生途径
体细胞胚胎发生是指双倍体或单倍体的体细胞(非合子细胞)在特定条件下,未经过性细胞融合而通过与合子胚胎发生类似的途径发育出新个体的形态发生途径。在林木组织培养中,可利用植物叶片、子房、花药、未成熟胚诱导体细胞发生,最后发育为完整的小植株。该途径形成的胚状体具有数量多,结构完整、繁殖速度快的特点,在该发生途径中非常重要的因子是培养基中的生长调节物质和含氮化合物,特别是生长素常用的生长素是2,4-D,NH4+ 对胚状体的形成起作用,因此培养基中常常添加水解酪蛋白、谷氨酰胺等,在林木组培扩繁中有五针松、挪威云杉、落叶松等针叶树用该方法的报道,在很多文献中报道ABA对体细胞的成熟影响巨大,一般用来抑制胚的早熟萌发,在许多植物的组织培养中都有关于Ag+影响体细胞胚胎发生的报道,Ag+对体细胞胚胎发生的作用在被子植物和裸子植物中可能具有体细胞胚的数量显著增加的相似的效果但总体来说,能诱导的林木种类还不多,发生机理尚不清楚。
参考文献:
[1]崔凯荣,陈克明,王晓哲,等植物体细胞胚胎发生研究的某些现状[J]. 植物学通报, 1993.10(3):14~20
[2]王雪婧,罗建勋.石大兴林木体细胞胚胎发生的研究进展[J].四川林业科技 2007(2)
[3]崔凯荣,戴若兰.植物体细胞胚发生的分子生物学[D].北京:科学出版社,2000.
[4]郭勇,崔堂兵,谢秀祯.植物细胞培养技术与应用[D].北京:化学工业出版社, 2004
[5]黄学林.李故菊.高等植物组织离体培养的形态建成及其调控[D].北京 :中国科学出版社.1995.150~251
作者简介:郭力宏(1968-),女,黑龙江哈尔滨人,在读生态学博士,工程师,主要从事城市园林绿化及珍惜濒危植物引种驯化的研究。