【摘 要】
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DNA错配修复(mismatch repair,MMR)功能缺失是确认的肿瘤发病机制之一.随着研究的深入以及临床诊断治疗的要求,有必要从整体上对肿瘤的错配修复功能状态作出评价.以M13mp2噬
【机 构】
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复旦大学附属肿瘤医院,上海,200032Laboratory of Molecular Genetics,National Institute of Environmental Health Scie
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DNA错配修复(mismatch repair,MMR)功能缺失是确认的肿瘤发病机制之一.随着研究的深入以及临床诊断治疗的要求,有必要从整体上对肿瘤的错配修复功能状态作出评价.以M13mp2噬菌体及其衍生株和E.coli大肠杆菌为材料,以lacZa为报告基因,构建含有错配碱基的异源双链DNA分子.提取错配修复功能完整细胞株(TK6)和错配修复功能缺陷细胞株(Lovo)的全细胞蛋白,经大T抗原依赖性SV-40DNA复制检测,证实其生物学功能保持完整后与构建成功的异源双链DNA分子共同作用,发现TK6对双碱基缺失del(2)的修复效率超过60%,对单碱基错配G@G的修复效率超过50%;而Lovo对双碱基缺失del(2)的修复效率低于20%,对单碱基错配G@G的修复效率低于10%.以异源双链DNA为待修复模板,以细胞株TK6和Lovo分别作为MMR功能完善和缺陷表型的参照,建立体外错配修复功能分析模型.应用该模型检测1例具有微卫星不稳定性表型的HNPCC病人肿瘤组织,发现其MMR功能丧失;而检测1例微卫星稳定的散发性直肠癌病人肿瘤组织,发现其具有MMR功能.结果表明该模型可用于体外检测各种肿瘤细胞和/或组织的错配修复功能.为肿瘤发病机制的研究提供了可靠的方法,对进一步了解错配修复功能状态在各种类型肿瘤中的作用有非常重要的意义.
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