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目的 建立一种同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC/MS/MS)测定血清可替宁的方法,以评价不同吸烟状况健康人的吸烟暴露水平分布状况.方法 以[D3]-可替宁作内标,乙腈沉淀蛋白、离心后吸取上清液、氮气挥干、流动相重组,液相分离后进人串联质谱分析；然后,采用多离子反应监测模式,以标准品制作标准曲线,结合同位素内标法定量建立同位素稀释液相色谱串联质谱法.用以对0 68、48.42、94.34、250.95、287.04 μg/L 5个水平血清样本进行5次重复分析,每次每种血清重复分析3份,以考察方法的精密度；同时测定与评价血清样本添加不同浓度标准品的加样回收率和样本在常温、4℃、-80℃保存的稳定性,以及2010年10月至12月期间94名健康志愿者在不同吸烟状况下的血清可替宁分布情况.并用Mann-Whitney U检验分析60名非吸烟、14名戒烟与20名吸烟健康志愿者血清可替宁含量的差异.结果 用ID-LC/MS/MS检测血清可替宁在本试验条件下分离良好,无内源性物质的干扰,具有较好的特异性；血清可替宁、内标峰面积比与可替宁浓度的线性相关系数≥0.9993;测定5个水平血清样本的总变异系数(CV)分别为4.71％、1.40％、1.98％、1.10％和1.03％；批内CV分别为2.19％、0.78％、0.75％、0.65％和0.67％,ID-LC/MS/MS的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.013和0.050 μg/L,具有较高的灵敏度；3次试验的加样回收率范围为99.22％ ～ 102.67％;样本在常温条件下放置2d、4 ℃放置7d以及-80℃冻存保存3个月测定结果的准确度为99.28％～ 100.87％,批间CV均＜5％.检测94名健康人血清可替宁水平呈偏态和尖态分布(偏度2.71,峰度6.65),其中,20名吸烟者的可替宁浓度为116.40 (63.17 ～241.12) μg/L,14名已成烟者为0.67 (0.15～0.95) μg/L,60名非吸烟者为0.22 (0.15 ～0.42) μg/L;已戒烟者(Z=-2.12,P＜0.05)和吸烟者(Z=-6.67,P＜0.001)血清可替宁浓度分别显著高于非吸烟者.结论 建立的ID-LC/MS/MS测定血清可替宁方法操作简便、特异、灵敏,可望在吸烟暴露水平评价及暴露与疾病发生危险的研究中提供有效技术平台.