荧光报告质粒构建及其在布鲁菌细胞侵袭试验中的应用

来源 :中国兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：seacowo

【摘要】

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采取质粒shuffling方法，将含GFPmut1的pPS858和能在布鲁菌中复制的质粒pBBRlMCS-2经KpnI酶切后连接，转化DH5a，利用双抗性筛选重组质粒pBBR1-GFP。将荧光质粒转入布鲁菌，获得荧光

【作者】

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钟志军乔凤于爽任志华徐杰王玉飞黄祥明陈泽良兰

【机构】

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四川农业大学动物医学院,军事医学科学院疾病预防控制所,海南省皮肤病医院海南省皮肤性病防治中心,成都大熊猫繁育研究基地四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

【出处】

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中国兽医学报

【发表日期】

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2014年1期

【关键词】

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布鲁菌荧光报告质粒侵袭试验 Brucella GFP reporter invasion assay

【基金项目】

：

国家“973“课题（2009cB522602）,国家自然科学基金资助项目（31000548）,教育部“长江学者和创新团队发展规划”创新团队项目（IRT0848）,四川农业大学“双支计划”项目（00270713）,成都大熊猫繁育研究基金会项目（CPF研2012-6）,四川省教育厅重点资助项目（13ZA0263）

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采取质粒shuffling方法，将含GFPmut1的pPS858和能在布鲁菌中复制的质粒pBBRlMCS-2经KpnI酶切后连接，转化DH5a，利用双抗性筛选重组质粒pBBR1-GFP。将荧光质粒转入布鲁菌，获得荧光标记布鲁菌，并用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞J774A．1，探讨其用于细胞侵袭试验的可行性。结果显示，成功构建布鲁菌荧光报告质粒pBBR1-GFP，用构建好的荧光标记布鲁菌侵染巨噬细胞后，在细胞内观察到带荧光的布鲁菌，且荧光强度与胞内细菌数成正比。细胞侵袭动态试验结果表明，细菌与细胞共孵

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