【摘 要】
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为了表达非洲马瘟病毒（AHSV）VP7蛋白并制备其多克隆抗体，参考GenBank中已公开的AHSV基因序列，人工合成编码AHSV-1 VP7蛋白的S7基因全长序列，利用PCR技术扩增得到S7基因片段，将其克隆到pFastBacTMHTb载体上，构建重组载体pFastBacTM-AHSVS7，通过蓝白斑试验筛选出重组杆粒Bacmid- AHSVS7，并转染昆虫细胞，拯救获得重组杆状病毒。SDS-PA
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
【基金项目】
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中国农业科学院创新工程项目（CAAS-ASTIP-2016-LVRI）； 农业农村部中央级公益性科研院所基本科研业务费项目（2021）；
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为了表达非洲马瘟病毒（AHSV）VP7蛋白并制备其多克隆抗体，参考GenBank中已公开的AHSV基因序列，人工合成编码AHSV-1 VP7蛋白的S7基因全长序列，利用PCR技术扩增得到S7基因片段，将其克隆到pFastBacTMHTb载体上，构建重组载体pFastBacTM-AHSVS7，通过蓝白斑试验筛选出重组杆粒Bacmid- AHSVS7，并转染昆虫细胞，拯救获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western-blot结果显示，AHSV-1 VP7重组蛋白在昆虫细胞中获得表达。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP7蛋白，将其免疫新西兰大白兔制备相应的多克隆抗体，该抗体不仅能与杆状病毒重组表达的AHSV-1 VP7蛋白反应，且能识别BHK21细胞中表达的AHSV-1 VP7蛋白，具有很好的特异性。本试验成功利用杆状病毒系统表达了AHSV-1 VP7重组蛋白，并制备了多克隆抗体，这为后续AHSV VP7蛋白功能的研究以及ELISA诊断方法的建立奠定了基础。
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