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东海大学医学部教授胜木元也等开发了不需考虑标记影响的新的同源重组法。这种方法是通过2次重组,将染色体上所瞄准的基因在不留标记基因的情况下置换成任意基因。该氏等使用这种方法培育出缺损癌抑制基因p53的新的癌病态小鼠。在1991年12月在福冈市召开的日本分子生物学会上发表。使用于第一次重组的载体是带有打算发生同源重组的部位的序列、及在期间作为标记的新霉素耐性