【摘 要】
：
目的 克隆表达出能够抑制补体活化的双功能域小分子补体受体1型(complementreceptor type 1,CR1)衍生物.方法 从外周血提取总RNA,进行RT-PCR扩增出功能性片段Ⅰ(CR1-SCR1-3);
论文部分内容阅读
目的 克隆表达出能够抑制补体活化的双功能域小分子补体受体1型(complementreceptor type 1,CR1)衍生物.方法 从外周血提取总RNA,进行RT-PCR扩增出功能性片段Ⅰ(CR1-SCR1-3);以本室构建的pET-32a-CR1-SCR15-18为模板扩增功能性片段Ⅱ(CR1-SCR15-17);利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)法扩增出包含双功能域的融合基因.将融合基因重组于pET-32a(+)载体,转化大肠杆菌Rosetta,经酶切及DNA序列测定鉴定后,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白质进行分析鉴定.蛋白质经Ni柱亲和层析及透析复性后,采用50%补体溶血抑制试验(CH50)进行功能鉴定.结果 酶切及DNA序列测定证实成功构建出了pET-32a-CR1-SCR(1-3+15-17)重组表达载体,IPTG诱导表达后在相对分子质量(Mr)为63×103处有一明显的条带,经Westernblot鉴定为目的 蛋白,Ni柱亲和层析获得纯度约为92%的目的 蛋白,功能试验证实,在0～200 μg/ml的融合蛋白剂量范围内,随着浓度的增加,补体抑制活性增强.结论 成功构建并在大肠杆菌内表达了具有较高生物活性的重组双功能域小分子CR1衍生物,为体内保护实验研究提供实验数据.
其他文献
研究了在不同磁场频率及电磁线圈匝数条件下结晶器内磁场的分布规律,并进行了静态浇注试验,考察了电磁场对7050铝合金凝固组织及溶质元素分布的影响。结果表明,电磁场能显著
以聚醚二元醇(N210)和2,4-甲苯二异氰酸酯(TDI)为原料,以自制的磺酸型亲水单体1,2-二羟基-3-丙磺酸钠(DHPA)作为扩链剂,制备了磺酸型水性聚氨酯(WPU)乳液;研究了R值[即R=n(-N
利用平面波法导出了光子晶体本征方程的矩阵形式,以此为基础计算了二维空气孔型正方形光子晶体在正入射时及斜入射时的带结构,并将带结构中混杂在一起的TE波和TM波的模式分离
为了强化地质体三维模型的空间分析与表达能力,文中基于单纯剖分理论给出了地质体三维建模方法,探讨了基于包容单形的三维地质体特征点、线、面的表达,给出了边界面查询、地
讨论了两种修复方法的系绕解的渐近稳定性.证明了系统在Banach空间中生成正压缩0半群,系统的#负稳定解恰是系统算子0本征值对应的本征向量,系统算子的谱点均位于复平面的左半
对2-(4-取代苯基)乙烯基吡啶系列用密度泛函法(DFT),在B3LYP/6-31+G**冰平上全优化几何构型,探讨苯环对位上不同取代基对分子电荷的转移、前线轨道能量等性质的影响规律。结
综述了几种聚氨酯/丙烯酸酯(PUA)复合乳液的制备方法,包括乳液共聚法、核壳聚合法、互穿聚合物网络法、无皂乳液聚合法、微乳液聚合法和细乳液聚合法等,并介绍了这些制备方法
采用脉冲激光沉积(PLD)技术和微电子平面工艺,用不同表面掺杂的Si作为衬底制备了ZnO/Si异质结,并且以p-Si(p-)为衬底制备了ZnO(含Mn 0.2%)/Si异质结、包含SiC缓冲层的ZnO/SiC
目的 探讨四型肽精氨酸转亚胺基酶(PADI4)功能基因多态性及其表达与类风湿关节炎(RA)的相关性.方法 采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测70例RA患者、81名