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【摘 要】 目的：以薯蓣皂苷元为对照品，建立黄精药材及其炮制品的薄层色谱鉴别方法。方法：采用硅胶G高效预制板，以氯仿-乙酸乙酯（15∶1）为展开剂上行展开。结果：经考察不同的提取方法，展开剂和不同的展开条件，确定了实验方法。应用本方法对10批药材及其不同炮制品进行试验，斑点清晰，分离度好。结论：本鉴别方法操作简便、灵敏度高，可用于黄精药材及炮制品的定性鉴别。
【关键词】 黄精；薯蓣皂苷元；薄层鉴别
【中图分类号】R2825 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）05-0014-03
Studies on TLC identification of Polygonatum and its processed products
LIU Jianjun1，LIU Ling2，XIA Jiao1，AO Jiao1，BAO Jiake3*
1Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China； 2Guiyang University of Medicine，Guiyang 50004，China；3Guizhou Center for Drug Evaluation and Certification，Guiyang 550004，China
Abstract：[WTHZ]Objective[WTBZ] Using Diosgeni as reference substances to establish a TLC identification method for Polygonatum and its processed products.[WTHZ]Methods[WTBZ] The sample was separated by using chloroformethyl acetate（15∶1）and silica gel G high prefabricated plate.[WTHZ]Rsults[WTBZ] By studying the different extraction methods，developer and different deployment conditions，experiment method was confirmed.The application of this method to test 10 batches of medicinal herbs and its different processed products.The spots were clear and separated good.[WTHZ]Conclusion[WTBZ] This identification method had the advantages of simple operation，high sensitivity， which can be used for the qualitative identification of Polygonatum medicinal herbs and processed products.
Keywords：Polygonatum sibiricum；Diosgenin；TLC identification
黄精为百合科黄精属植物滇黄精Polygonatum kingia-num Collet Hemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎，按形状不同，习称大黄精、鸡头黄精、姜形黄精[1]。黄精味甘，性平，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。据报道[2-3]，黄精主要含有多糖和皂苷类化合物，其中皂苷类化合物具有免疫调节、抗氧化、抗疲劳、降血糖、降血脂、抗肿瘤和改善学习记忆等作用。在2010版中国药典中，黄精药材的薄层鉴别以药材为对照品，为了进一步强化其定性鉴别的手段，本文以薯蓣皂苷元为对照，建立黄精药材的薄层鉴别方法。
1 仪器和材料
11 仪器 水浴锅（DK-98-11A，天津市泰斯特仪器有限公司）；METTLER TOLEDO XS205分析天平；KQ-300DE型数控超声波清洗器。
12 材料 硅胶G高效预制板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20131212）；硅胶G（青岛海洋化工有限公司，批号：0120246）；薯蓣皂苷元（批号20130111）；药材样品经贵州省食品药品检验所中药检测室鉴定为黄精药材；所用试剂均为分析纯。
2 药材来源及炮制方法[4]
21 药材来源 对主产地贵州省范围内的黄精进行收集，由贵州省食品药品检验所李杨老师鉴定为Polygonatum sibiricum Red、Polygonatum cyrtonema Hua，来源见表1。
22 蒸黄精 取原药材，除去杂质，洗净，大小分开，略泡，润透，置适宜容器内蒸8～12h，停火，置容器内闷过夜，取出，切厚片，干燥。
23 酒黄精 取原药材，除去杂质，洗净，略泡，润透，置适宜容器内蒸8～12h，切厚片，晾至半干；加酒拌匀，闷透，照酒蒸法（附录一炮制通则）反复蒸至表面棕黑色，内部深褐色，切厚片，干燥；或取蒸黄精片，照酒蒸法（附录一炮制通则）反复蒸至表面棕黑色，内部深褐色，干燥。
3 方法与结果
31 溶液制备方法
311 供试品溶液 取黄精药材粉末（过二号筛）约2g，置锥形瓶中，加入50ml乙醇，超声处理（功率160W，频率40kHz）40min，摇匀，过滤。精密量取续滤液25ml，加石油醚（60～90℃）25ml，加盐酸9ml，回流水解2h，冷却，继以石油醚（60～90℃）振摇提取3次，每次30ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加乙醇溶解并转移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，即得。 312 对照品溶液 取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，制成浓度为004mg/ml的溶液。
32 色谱条件的优化
321 展开剂及展开条件的考察和比较 通过一系列预试验，确定基本操作方法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，将展开剂倒于展缸中预饱和30min，薄层板预饱和20min 展开后，上行展开，展距8cm。取出，晾干，喷以5%硫酸香草醛溶液显色。
考察三氯甲烷-甲醇（4∶1）、石油醚-三氯甲烷（1∶1）、三氯甲烷-乙酸乙酯（4∶1）三种展开系统，实验表明，只有三氯甲烷-乙酸乙酯（4∶1）可以达到将黄精药材薄层色谱斑点展开和分离的结果。经进一步对三氯甲烷-乙酸乙酯展开系统的有关比例进行调整，结果表明以三氯甲烷-乙酸乙酯（15∶1）展开后，薯蓣皂苷元的Rf值合适且两点能很好分离。结果见表2。
322 点样方式和点样量的比较 考察点状点和条带状点两种方式，结果显示，点条带状点比较容易出现拖尾且斑点分离不明显，点状点斑点比较清晰。在点样量为5μl时，薯蓣皂苷元溶液与供试品溶液斑点都过浅且日光下无法查看。当点样量增加到10μl时，薯蓣皂苷元溶液与供试品溶液分离效果明显，斑点清晰。故确定薯蓣皂苷元与供试品溶液点样量各为10μl。
323 薄层板的考察 分别考察了硅胶G预制板与硅胶G（批号：0120246）自制板两种薄层板。结果表明：两种薄层板上供试品与对照品的色谱行为基本一致，斑点清晰且能较好的分离。结果见图1、2。
324 温度影响的考察 分别在高温（40℃）和低温（4℃）进行了考察：结果表明供试品和对照品在高温和低温时的色谱行为一致，各斑点能较好的分离，说明在高温和低温条件下本方法具有良好的适应性，结果见图3、图4。
325 湿度影响的考察 分别在高湿（72 %）、中湿（50 %）和低湿（18 %）条件下进行考察，湿度以不同浓度的硫酸溶液进行控制。将点样后的薄层板放入展开缸，另一侧的展开槽里放一定浓度的硫酸，密闭15～30min后再加展开剂展开。当硫酸-水（100∶955，V/V）时，相对湿度为72%；当硫酸-水（50∶100，V/V）时，相对湿度为50%；当硫酸-水（275∶100，V/V）；时，相对湿度为18%。结果表明供试品和对照品在高湿、中湿和低湿环境各斑点均能实现较好的分离，说明本方法具有良好的环境适应性，结果见图5-7。
326 色谱条件的确定 取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别点于同一薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯（15∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸香草醛试液，105℃下显色后置日光下检视。
4 样品的测定
41 生黄精的测定结果 取10批黄精药材，按“311项”下制备的供试品溶液后，按“326”确定的色谱条件进行检测，结果见图8。
42 蒸黄精的测定结果 取10批蒸黄精，按“311项”下制备的供试品溶液后，按“326”确定的色谱条件进行检测，结果见图9。
43 酒黄精的鉴定 取10批酒黄精，按“311项”下制备的供试品溶液后，按“326”确定的色谱条件进行检测，结果见图10。
5 结论与讨论
以薯蓣皂苷元为对照品的黄精药材薄层鉴别方法曾有文献报道[5]，但其所使用的展开剂为苯与丙酮，因苯的毒性大，出于对试验人员安全和减少试验对环境污染考虑，本研究采用氯仿与乙酸乙酯作为展开剂。该方法操作简单、分离度好、斑点清晰、经对10批药材及其不同炮制品进行试验，均表明本薄层色谱鉴别方法重现性好，灵敏度高，可用于黄精药材及炮制品的定性鉴别。
参考文献
[1]国家药典委员.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：154.
[2]庞玉新，赵致，袁瑷，等.黄精的化学成分及药理作用[J].山地农业生物学报，2003，22（6）：547-550.
[3]祝凌丽，徐维平.黄精总皂苷和多糖的药理作用及其提取方法的研究进展 [J].安徽医药，2009，13（7）：719 -722.
[4]贵州省食品药品监督管理局.贵州省中药饮片炮制规范（2005年版）[M].贵阳：贵州科技出版社，2005：223.
[5]陈丽娜，高艳坤，都述虎.黄精质量标准的研究[J].中药材，2006，36（12）：1367-1369.
（收稿日期：20141205）
【关键词】 黄精；薯蓣皂苷元；薄层鉴别
【中图分类号】R2825 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）05-0014-03
Studies on TLC identification of Polygonatum and its processed products
LIU Jianjun1，LIU Ling2，XIA Jiao1，AO Jiao1，BAO Jiake3*
1Guiyang University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China； 2Guiyang University of Medicine，Guiyang 50004，China；3Guizhou Center for Drug Evaluation and Certification，Guiyang 550004，China
Abstract：[WTHZ]Objective[WTBZ] Using Diosgeni as reference substances to establish a TLC identification method for Polygonatum and its processed products.[WTHZ]Methods[WTBZ] The sample was separated by using chloroformethyl acetate（15∶1）and silica gel G high prefabricated plate.[WTHZ]Rsults[WTBZ] By studying the different extraction methods，developer and different deployment conditions，experiment method was confirmed.The application of this method to test 10 batches of medicinal herbs and its different processed products.The spots were clear and separated good.[WTHZ]Conclusion[WTBZ] This identification method had the advantages of simple operation，high sensitivity， which can be used for the qualitative identification of Polygonatum medicinal herbs and processed products.
Keywords：Polygonatum sibiricum；Diosgenin；TLC identification
黄精为百合科黄精属植物滇黄精Polygonatum kingia-num Collet Hemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎，按形状不同，习称大黄精、鸡头黄精、姜形黄精[1]。黄精味甘，性平，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾的功效。据报道[2-3]，黄精主要含有多糖和皂苷类化合物，其中皂苷类化合物具有免疫调节、抗氧化、抗疲劳、降血糖、降血脂、抗肿瘤和改善学习记忆等作用。在2010版中国药典中，黄精药材的薄层鉴别以药材为对照品，为了进一步强化其定性鉴别的手段，本文以薯蓣皂苷元为对照，建立黄精药材的薄层鉴别方法。
1 仪器和材料
11 仪器 水浴锅（DK-98-11A，天津市泰斯特仪器有限公司）；METTLER TOLEDO XS205分析天平；KQ-300DE型数控超声波清洗器。
12 材料 硅胶G高效预制板（青岛海洋化工厂分厂，批号：20131212）；硅胶G（青岛海洋化工有限公司，批号：0120246）；薯蓣皂苷元（批号20130111）；药材样品经贵州省食品药品检验所中药检测室鉴定为黄精药材；所用试剂均为分析纯。
2 药材来源及炮制方法[4]
21 药材来源 对主产地贵州省范围内的黄精进行收集，由贵州省食品药品检验所李杨老师鉴定为Polygonatum sibiricum Red、Polygonatum cyrtonema Hua，来源见表1。
22 蒸黄精 取原药材，除去杂质，洗净，大小分开，略泡，润透，置适宜容器内蒸8～12h，停火，置容器内闷过夜，取出，切厚片，干燥。
23 酒黄精 取原药材，除去杂质，洗净，略泡，润透，置适宜容器内蒸8～12h，切厚片，晾至半干；加酒拌匀，闷透，照酒蒸法（附录一炮制通则）反复蒸至表面棕黑色，内部深褐色，切厚片，干燥；或取蒸黄精片，照酒蒸法（附录一炮制通则）反复蒸至表面棕黑色，内部深褐色，干燥。
3 方法与结果
31 溶液制备方法
311 供试品溶液 取黄精药材粉末（过二号筛）约2g，置锥形瓶中，加入50ml乙醇，超声处理（功率160W，频率40kHz）40min，摇匀，过滤。精密量取续滤液25ml，加石油醚（60～90℃）25ml，加盐酸9ml，回流水解2h，冷却，继以石油醚（60～90℃）振摇提取3次，每次30ml，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加乙醇溶解并转移至5ml量瓶中，加乙醇至刻度，即得。 312 对照品溶液 取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，制成浓度为004mg/ml的溶液。
32 色谱条件的优化
321 展开剂及展开条件的考察和比较 通过一系列预试验，确定基本操作方法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，点于同一硅胶G薄层板上，将展开剂倒于展缸中预饱和30min，薄层板预饱和20min 展开后，上行展开，展距8cm。取出，晾干，喷以5%硫酸香草醛溶液显色。
考察三氯甲烷-甲醇（4∶1）、石油醚-三氯甲烷（1∶1）、三氯甲烷-乙酸乙酯（4∶1）三种展开系统，实验表明，只有三氯甲烷-乙酸乙酯（4∶1）可以达到将黄精药材薄层色谱斑点展开和分离的结果。经进一步对三氯甲烷-乙酸乙酯展开系统的有关比例进行调整，结果表明以三氯甲烷-乙酸乙酯（15∶1）展开后，薯蓣皂苷元的Rf值合适且两点能很好分离。结果见表2。
322 点样方式和点样量的比较 考察点状点和条带状点两种方式，结果显示，点条带状点比较容易出现拖尾且斑点分离不明显，点状点斑点比较清晰。在点样量为5μl时，薯蓣皂苷元溶液与供试品溶液斑点都过浅且日光下无法查看。当点样量增加到10μl时，薯蓣皂苷元溶液与供试品溶液分离效果明显，斑点清晰。故确定薯蓣皂苷元与供试品溶液点样量各为10μl。
323 薄层板的考察 分别考察了硅胶G预制板与硅胶G（批号：0120246）自制板两种薄层板。结果表明：两种薄层板上供试品与对照品的色谱行为基本一致，斑点清晰且能较好的分离。结果见图1、2。
324 温度影响的考察 分别在高温（40℃）和低温（4℃）进行了考察：结果表明供试品和对照品在高温和低温时的色谱行为一致，各斑点能较好的分离，说明在高温和低温条件下本方法具有良好的适应性，结果见图3、图4。
325 湿度影响的考察 分别在高湿（72 %）、中湿（50 %）和低湿（18 %）条件下进行考察，湿度以不同浓度的硫酸溶液进行控制。将点样后的薄层板放入展开缸，另一侧的展开槽里放一定浓度的硫酸，密闭15～30min后再加展开剂展开。当硫酸-水（100∶955，V/V）时，相对湿度为72%；当硫酸-水（50∶100，V/V）时，相对湿度为50%；当硫酸-水（275∶100，V/V）；时，相对湿度为18%。结果表明供试品和对照品在高湿、中湿和低湿环境各斑点均能实现较好的分离，说明本方法具有良好的环境适应性，结果见图5-7。
326 色谱条件的确定 取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别点于同一薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯（15∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%硫酸香草醛试液，105℃下显色后置日光下检视。
4 样品的测定
41 生黄精的测定结果 取10批黄精药材，按“311项”下制备的供试品溶液后，按“326”确定的色谱条件进行检测，结果见图8。
42 蒸黄精的测定结果 取10批蒸黄精，按“311项”下制备的供试品溶液后，按“326”确定的色谱条件进行检测，结果见图9。
43 酒黄精的鉴定 取10批酒黄精，按“311项”下制备的供试品溶液后，按“326”确定的色谱条件进行检测，结果见图10。
5 结论与讨论
以薯蓣皂苷元为对照品的黄精药材薄层鉴别方法曾有文献报道[5]，但其所使用的展开剂为苯与丙酮，因苯的毒性大，出于对试验人员安全和减少试验对环境污染考虑，本研究采用氯仿与乙酸乙酯作为展开剂。该方法操作简单、分离度好、斑点清晰、经对10批药材及其不同炮制品进行试验，均表明本薄层色谱鉴别方法重现性好，灵敏度高，可用于黄精药材及炮制品的定性鉴别。
参考文献
[1]国家药典委员.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：154.
[2]庞玉新，赵致，袁瑷，等.黄精的化学成分及药理作用[J].山地农业生物学报，2003，22（6）：547-550.
[3]祝凌丽，徐维平.黄精总皂苷和多糖的药理作用及其提取方法的研究进展 [J].安徽医药，2009，13（7）：719 -722.
[4]贵州省食品药品监督管理局.贵州省中药饮片炮制规范（2005年版）[M].贵阳：贵州科技出版社，2005：223.
[5]陈丽娜，高艳坤，都述虎.黄精质量标准的研究[J].中药材，2006，36（12）：1367-1369.
（收稿日期：20141205）