【摘 要】
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目的:探究miR-939-5p对糖尿病性视网膜病变和人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)的调控作用.方法:将miR-939-5p模拟物(miR-939-5p-mimic)或miR-939-5p抑制剂(miR-939-5p-inhibitor)转染到HRMEC中,并将细胞用高糖(HG组,25 mM)或低糖(LG组,5mM)处理24h.通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)来检测细胞活力,EdU法检测细胞DNA的复制能力,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,使用双荧光素酶试剂盒E2920验证miR-939
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院眼科 陕西西安710061;西安市第一医院眼科 陕西西安710002;西安市第四医院眼科 陕西西安710004
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目的:探究miR-939-5p对糖尿病性视网膜病变和人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)的调控作用.方法:将miR-939-5p模拟物(miR-939-5p-mimic)或miR-939-5p抑制剂(miR-939-5p-inhibitor)转染到HRMEC中,并将细胞用高糖(HG组,25 mM)或低糖(LG组,5mM)处理24h.通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)来检测细胞活力,EdU法检测细胞DNA的复制能力,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡,使用双荧光素酶试剂盒E2920验证miR-939-5p与NOS23\'-UTR之间的结合关系.对大鼠腹腔注射65 mg/kg的链脲佐菌素(STZ)诱导DR模型,通过RT-qPCR检测miR-939-5p水平,Western Blot检测诱导型一氧化氮合酶(NOS2)水平,苏木精伊红(HE)染色检查大鼠视网膜形态,免疫组织化学染色检测视网膜Claudin-5和Occludin的表达,伊文思蓝染色检测大鼠血视网膜屏障(BRB)通透性,EHSA法检测大鼠房水中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.结果:与LG组的HRMEC相比,HG组的miR-939-5p显著降低,而NOS2蛋白水平显著升高(P＜0.05).荧光素酶活性测定显示,与NC-mimic组相比,miR-939-5p-mimic与pGL3-NOS2-WT共转染组的荧光素酶活性显著降低(P＜0.05).与HG+NC-mimic组相比,HG+miR-939-5p-mimic组的miR-939-5p水平和细胞活力显著升高,而NOS2蛋白水平和细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).与DR组相比,miR-939-5p-Agomir组大鼠视网膜组织病变减轻,Claudin-5和Occludin的表达水平明显升高,伊文思蓝浓度显著降低(P＜0.05);与DR组相比,miR-939-5p-Agomir组大鼠房水中IL-1β和TNF-α的水平均显著降低(P＜0.05).结论:在高糖培养的HRMEC中和DR大鼠视网膜中,miR-939-5p为低表达模式,NOS2为高表达模式.上调miR-939-5p通过靶向抑制NOS2对DR大鼠视网膜和HRMEC提供保护作用.
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