【摘 要】
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采用脂质体介导法,将绿色荧光蛋白(pEGFP-C1、pEGFP-N3)、增强型青色荧光蛋白(pECFP-N1、pECFP-mito)、黄色荧光蛋白(pEYFP-N1)和红色荧光蛋白(pDsRed1-N1)等6种荧光蛋白基因
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,中国海洋大学生命与技术学部,内蒙古农业大学动物科学与医学学院
【基金项目】
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基金项目：国家自然科技资源平台建设项目（2005DKA30450）,国家自然科技资源平台建设项目（2004DKA30450）
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采用脂质体介导法,将绿色荧光蛋白(pEGFP-C1、pEGFP-N3)、增强型青色荧光蛋白(pECFP-N1、pECFP-mito)、黄色荧光蛋白(pEYFP-N1)和红色荧光蛋白(pDsRed1-N1)等6种荧光蛋白基因导入蒙古羊体外培养成纤维细胞中,对基因的时空表达、阳性细胞生长与增殖状况、细胞凋亡与细胞活力以及提高基因表达率的最佳方法等方面进行了深入的研究。试验结果表明:6种荧光蛋白基因在转染后24、48和72h的转染率在12.3%~63.3%之间,经多重比较,各试验组之间有较大差异。转染24 h后,6种荧光蛋白都均匀地充满细胞质和细胞核,只有囊状小泡没有标记荧光;转染48h后,EGFP、ECFP和EYFP仍在整个细胞中均匀表达,呈弥散分布状态,随着表达量的增加,在细胞核局部呈现块状或颗粒状的基因表达产物;DsRed荧光蛋白基因则主要在细胞核膜周围呈现由诸多颗粒状表达产物组成的环状轮廓;在优化的条件下,细胞凋亡率、阳性细胞的形态、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。本研究结果对于标记基因、核移植及转基因动物克隆等研究具有重要的参考价值。
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