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摘 要：建立超高效液相色谱法測定茶叶中7种儿茶素类茶多酚，通过调整流动相乙腈-0.1%甲酸溶液梯度，优化了分离度，进行了加标回收试验，结果表明，在10～100 μg/mL范围内，7种儿茶素的峰面积呈现良好的线性关系，相关系数不低于0.999，检出限为6.1～97.8 mg/kg，加标回收率93.1～96.8%，相对标准偏差在1.7%～3.3%。该方法具有分析时间短，回收率、精密度高的优点。
关键词：超高效液相色谱;儿茶素;茶叶
茶叶中富含多种营养成分[1-2]，有效成分的含量和种类对茶叶的品质至关重要。茶叶中主要的抗氧化活性成分为茶多酚[3-4]，约占茶叶干重的20%～30%。除此之外，茶多酚还具有抗氧化、抗癌、抑菌、降压和降脂[5]等保健功效。茶多酚主要包括黄酮类、黄酮醇、儿茶素类、黄青素类、酚酸类等物质，其中儿茶素类含量最高，占茶多酚的60%～80%。儿茶素[6]包括儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、没食子酸和咖啡因等。
茶多酚中儿茶素类化合物的检测方法多为液相色谱法，
如GB/T 8313—2018，高效液相色检测方法分析时间较长，试剂消耗量较大。本研究在此基础上，利用超高效液相色谱法建立了同时测定7种儿茶素茶多酚定量方法，方法分析速度快，操作简单，可用于茶叶中儿茶素类的测定。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
LC30A超高效液相色谱仪（日本岛津公司）、MS3涡旋震荡器（德国IKA公司）、Allegra 64R低温高速离心机（美国贝克曼公司）、ME204电子天平（瑞士梅特勒公司）。
1.2 材料与试剂
乙腈、甲醇（HPLC级，美国天地），甲酸（HPLC级，阿拉丁），水（实验室自制超纯水）。对照品：没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯（纯度>98%，北京坛墨质检）
1.3 实验方法
1.3.1 标准溶液的制备
混合标准溶液：准确称取各标准物50 mg，混合后用甲醇溶解稀释定容至50 mL，配制成浓度为1.00 mg/mL的混合标准储备液;分别取1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL和10.0 mL储备液用甲醇稀释定容至100 mL，配制成浓度为10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、80.00 μg/mL和100.0 μg/mL系列混合标准工作液。
1.3.2 样品处理
称取约0.2 g（0.000 1 g）茶叶样品于10 mL离心管中，加入5 mL 70%甲醇，40 ℃下超声提取30 min（每间隔10 min涡旋1 min），8 000 r/min离心5 min，重复提取1次，合并两次溶液于10 mL容量瓶，混匀后吸取1.00 mL用水1∶1稀释后过0.22 μm尼龙滤膜，液相色谱测定。
1.4 色谱条件
色谱柱：Shim-pack XR-ODS III（2 mm×75 mm，1.6 μm）;流速：0.5 mL/min;进样量5 μL，柱温40 ℃;流动相A：
0.1%甲酸乙腈溶液，流动相B：0.1%甲酸水溶液;洗脱程序（A）：0～1 min，5%升至95%，4.5 min维持95%;7.0 min降至70%维持至8 min;检测波长：280 nm;检测器采集频率：100 ms;外标法定量。
2 结果与分析
2.1 洗脱程序优化
本文采用的超高效液相色谱法测定茶叶中儿茶素类和咖啡碱，色谱峰较窄，为获得较高的重复性，设定的紫外检测器检测频率为100 ms，进样量5 μL，以保证的每个峰的采集点数多于20个，且峰较窄，更有利于分离;乙腈和甲醇相比较，乙腈能有效的降低柱压，得到更窄的色谱峰，响应强度更高，有利于提升检测灵敏度，能较好的分离7种化合物，分析时间小于8 min，色谱图如图1所示。
2.2 标准曲线及定量限
按照确定的样品预处理方法和液相检测条件，依次测定浓度10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L、80.00 mg/L和100.0 mg/L，混合标准系列工作溶液，得到线性回归方程，线性关系良好。以20 mg/L浓度的混标标准品溶液进行液相分析，以各目标峰的信噪比（S/N≥3）分别确认7种儿茶素的检出限，如表1表示。
2.3 准确度和精密度
选择样品测定6次，计算目标物含量后，于0.2 g样品中加入0.2 mL 100 mg/mL，按确定的方法进行处理（n=6），计算加标回收率和精密度，见表2。
3 结论
本研究基于超高效液相色谱法建立了一种处理简单、快速、准确定量分析茶叶中没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯7种茶多酚方法，与GB/T 8313—2018相比，优化了色谱条件，提高了检测灵敏度，缩短了检测分析时间。
结果显示，本方法可以在8 min内完成7种茶多酚的检测，具有良好的准确度和精密度，在10～100 mg/L范围内，信号响应值呈现良好的线性关系，线性相关系数大于0.999，检出限为6.1～97.8 mg/kg，加标回收率93.1%～96.8%，相对标准偏差在1.7～3.3%。
参考文献
[1]王丽丽，林清霞，宋振硕，等.分光光度法测定茶叶中总黄酮含量[J].茶叶学报，2021，62（1）：1-6.
[2]王奕霏，王珊姗，陈丰，等.高效液相色谱法测定茶叶中有效成分含量的方法综述[J].化工设计通讯，2020，46（6）：156-158.
[3]林清霞，王丽丽，杨军国，等.基于DPPH法的茶叶儿茶素类抗氧化谱效关系研究[J].福建农业学报，2020，35（2）：210-216.
[4]白亚欣，侯彩云.几种茶叶生化成分及其抗氧化活性分析[J].中国食物与营养，2020，26（1）：31-36.
[5]张建勇，王伟伟，王蔚，等.茶多酚保健及药理功能的应用[J].中国茶叶，2020，42（12）：9-15.
[6]王芬，裴会敏，陈志，等.茶多酚功能及代谢机理研究进展[J].现代食品，2020（14）：21-22.
关键词：超高效液相色谱;儿茶素;茶叶
茶叶中富含多种营养成分[1-2]，有效成分的含量和种类对茶叶的品质至关重要。茶叶中主要的抗氧化活性成分为茶多酚[3-4]，约占茶叶干重的20%～30%。除此之外，茶多酚还具有抗氧化、抗癌、抑菌、降压和降脂[5]等保健功效。茶多酚主要包括黄酮类、黄酮醇、儿茶素类、黄青素类、酚酸类等物质，其中儿茶素类含量最高，占茶多酚的60%～80%。儿茶素[6]包括儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、没食子酸和咖啡因等。
茶多酚中儿茶素类化合物的检测方法多为液相色谱法，
如GB/T 8313—2018，高效液相色检测方法分析时间较长，试剂消耗量较大。本研究在此基础上，利用超高效液相色谱法建立了同时测定7种儿茶素茶多酚定量方法，方法分析速度快，操作简单，可用于茶叶中儿茶素类的测定。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
LC30A超高效液相色谱仪（日本岛津公司）、MS3涡旋震荡器（德国IKA公司）、Allegra 64R低温高速离心机（美国贝克曼公司）、ME204电子天平（瑞士梅特勒公司）。
1.2 材料与试剂
乙腈、甲醇（HPLC级，美国天地），甲酸（HPLC级，阿拉丁），水（实验室自制超纯水）。对照品：没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯（纯度>98%，北京坛墨质检）
1.3 实验方法
1.3.1 标准溶液的制备
混合标准溶液：准确称取各标准物50 mg，混合后用甲醇溶解稀释定容至50 mL，配制成浓度为1.00 mg/mL的混合标准储备液;分别取1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL和10.0 mL储备液用甲醇稀释定容至100 mL，配制成浓度为10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50.0 μg/mL、80.00 μg/mL和100.0 μg/mL系列混合标准工作液。
1.3.2 样品处理
称取约0.2 g（0.000 1 g）茶叶样品于10 mL离心管中，加入5 mL 70%甲醇，40 ℃下超声提取30 min（每间隔10 min涡旋1 min），8 000 r/min离心5 min，重复提取1次，合并两次溶液于10 mL容量瓶，混匀后吸取1.00 mL用水1∶1稀释后过0.22 μm尼龙滤膜，液相色谱测定。
1.4 色谱条件
色谱柱：Shim-pack XR-ODS III（2 mm×75 mm，1.6 μm）;流速：0.5 mL/min;进样量5 μL，柱温40 ℃;流动相A：
0.1%甲酸乙腈溶液，流动相B：0.1%甲酸水溶液;洗脱程序（A）：0～1 min，5%升至95%，4.5 min维持95%;7.0 min降至70%维持至8 min;检测波长：280 nm;检测器采集频率：100 ms;外标法定量。
2 结果与分析
2.1 洗脱程序优化
本文采用的超高效液相色谱法测定茶叶中儿茶素类和咖啡碱，色谱峰较窄，为获得较高的重复性，设定的紫外检测器检测频率为100 ms，进样量5 μL，以保证的每个峰的采集点数多于20个，且峰较窄，更有利于分离;乙腈和甲醇相比较，乙腈能有效的降低柱压，得到更窄的色谱峰，响应强度更高，有利于提升检测灵敏度，能较好的分离7种化合物，分析时间小于8 min，色谱图如图1所示。
2.2 标准曲线及定量限
按照确定的样品预处理方法和液相检测条件，依次测定浓度10.0 mg/L、20.0 mg/L、50.0 mg/L、80.00 mg/L和100.0 mg/L，混合标准系列工作溶液，得到线性回归方程，线性关系良好。以20 mg/L浓度的混标标准品溶液进行液相分析，以各目标峰的信噪比（S/N≥3）分别确认7种儿茶素的检出限，如表1表示。
2.3 准确度和精密度
选择样品测定6次，计算目标物含量后，于0.2 g样品中加入0.2 mL 100 mg/mL，按确定的方法进行处理（n=6），计算加标回收率和精密度，见表2。
3 结论
本研究基于超高效液相色谱法建立了一种处理简单、快速、准确定量分析茶叶中没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、咖啡碱、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯和表儿茶素没食子酸酯7种茶多酚方法，与GB/T 8313—2018相比，优化了色谱条件，提高了检测灵敏度，缩短了检测分析时间。
结果显示，本方法可以在8 min内完成7种茶多酚的检测，具有良好的准确度和精密度，在10～100 mg/L范围内，信号响应值呈现良好的线性关系，线性相关系数大于0.999，检出限为6.1～97.8 mg/kg，加标回收率93.1%～96.8%，相对标准偏差在1.7～3.3%。
参考文献
[1]王丽丽，林清霞，宋振硕，等.分光光度法测定茶叶中总黄酮含量[J].茶叶学报，2021，62（1）：1-6.
[2]王奕霏，王珊姗，陈丰，等.高效液相色谱法测定茶叶中有效成分含量的方法综述[J].化工设计通讯，2020，46（6）：156-158.
[3]林清霞，王丽丽，杨军国，等.基于DPPH法的茶叶儿茶素类抗氧化谱效关系研究[J].福建农业学报，2020，35（2）：210-216.
[4]白亚欣，侯彩云.几种茶叶生化成分及其抗氧化活性分析[J].中国食物与营养，2020，26（1）：31-36.
[5]张建勇，王伟伟，王蔚，等.茶多酚保健及药理功能的应用[J].中国茶叶，2020，42（12）：9-15.
[6]王芬，裴会敏，陈志，等.茶多酚功能及代谢机理研究进展[J].现代食品，2020（14）：21-22.