无病毒可回复性肝细胞永生化载体的构建和结构鉴定

来源 :现代消化及介入诊疗 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lah822900

【摘要】

：

目的构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体，优化目前的肝细胞永生化方法。方法构建含人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体，PCR扩增attBl-Koza

【作者】

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李爱民王亚东王泽楠张洁罗晓蓓燕群白杨林建华刘

【机构】

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南方医科大学南方医院消化内科,南方医科大学南方医院肝胆外科

【出处】

：

现代消化及介入诊疗

【发表日期】

：

2012年2期

【关键词】

：

生物人工肝肝细胞永生化人端粒酶逆转录酶 PIGGYBAC转座子 Artificial liver Reversible immortalization

【基金项目】

：

广东省教育部产学研结合项目（20118090400018）,广东省科技计划项目（20098060300020）,广东省高等学校人才引进专项资金项目（粤财教字[2011]31号）

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目的构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体，优化目前的肝细胞永生化方法。方法构建含人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体，PCR扩增attBl-Kozak—hTERT（前端）-attB2和attBl-hTERT（后端）／E2AJeGFP／F2A／neo—attB2．对相应大小条带切胶回收后，通过Gamway重组克隆技术BR反应和LR反应，以及酶切连接，构建最终目的载体PB-hTERT／E2A/eGFP／F2A／neo。结果PCR及酶切和测序鉴定均证实成功构建了肝细胞永生化

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