B→O血型转变工具酶α-半乳糖苷酶cDNA克隆及表达

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：coosi

【摘要】

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α-半乳糖苷酶是实现B→O血型转变、制备通用型血的关键工具酶.利用反转录PCR方法从中国海南Catimor咖啡豆中克隆α-半乳糖苷酶cDNA,插入嗜甲基酵母P.pastoris分泌表达栽体pP

【作者】

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杨军宫锋季守平任会明刘泽澎高新章扬培

【机构】

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军事医学科学院野战输血研究所北京 100850

【出处】

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中国生物化学与分子生物学报

【发表日期】

：

2000年4期

【关键词】

：

B→O血型转变 Catimor咖啡豆 α-半乳糖苷酶 cDNA克隆 P.pastoris

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α-半乳糖苷酶是实现B→O血型转变、制备通用型血的关键工具酶.利用反转录PCR方法从中国海南Catimor咖啡豆中克隆α-半乳糖苷酶cDNA,插入嗜甲基酵母P.pastoris分泌表达栽体pPIC9K中,转化P.pastoris GS115,筛选高表达重组茵株.经甲醇诱导表达7 d后,发酵液总蛋白分泌量约1.2 mg/ml,SDS-PAGE呈现约41 kD特异表达带,与专一性底物对-硝基-苯基-a-D-吡喃半乳糖苷反应证明,表达产物具有α-半乳糖苷酶活性,最高达到18 U/ml.初步实验表明,表达的α-半乳糖苷酶可酶解B型红细胞,成功实现B→O血型转变.

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