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【摘要】 目的 检测霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液IL2、IL8、IL10和TNFα水平，以探讨其在发病机制中的作用。方法 85例霉菌性阴道炎患者分别留取血清及阴道灌洗液，－20℃冻存，采用双抗体夹心ELISA法检测IL2、IL8、IL10及TNFα并与80例健康体检的妇女进行对比观察。结果 霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中IL8、IL10和TNFα与正常对照组比较均有显著性差异（P＜0.05或0.01）。结论 细胞因子IL2、IL8、IL10和TNFα参与霉菌性阴道炎的发病，其中TNFα可能直接参与并介导免疫损伤。
【关键词】 霉菌性阴道炎；白细胞介素类；肿瘤坏死因子；T淋巴细胞
文章编号：1003-1383(2010)02-0136-02 中图分类号：R 711.31 文献标识码：A
doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2010.02.008
Clinical significance of the change of IL2,IL8,IL10 and TNFαin patients with mycotic vaginitis
ZHAO Suping,HUANG Yuena,WEN Yanping,LI Wenlian,LI Yuanjun,PAN Xiaoju,DONG Bizhen
(Department of Gynemetrics,The Hospital of Tradition Chinese Medicine Qiannan Autonomous Prefecturefor Buyi and Miao Nationalities of Guizhou province,Duyun 558000,China)
【Abstract】 Objective To evaluate the pathogenesis role of IL2,IL8，IL10 and TNFαin patients with mycotic vaginitis.
Methods Serum and vaginal lavage were collected from 85 patients with viginitis fungosa and 80 healthy women,then frozen to -20℃.The concentration of IL2,IL8,IL10 and TNFαinwere detected by doublesandwich elisa.Results The level of IL2,IL8 and TL10 and TNFαin serum and vaginal lavage of treatment group was significantly higher than that of control group(P＜0.05 or 0.01).Con
clusion Cylokines such as IL2,IL8,IL10 and TNFα play an role in the pathogenesis of viginitis fungosa.TNFα may participate and mediate the immune injury directly.
【Key words】 mycotic vaginitis;interleukins;tumour necrosis factor；Tlymphovytes
霉菌性阴道炎是妇科门诊的常见病。下生殖道感染时，机体免疫系统的变化是临床关注的重点，阴道局部的免疫变化与全身免疫变化不一致，霉菌性阴道炎的发生可能与局部免疫功能异常有关［1］。为了探讨霉菌性阴道炎患者阴道局部免疫状态的变化，我们检测霉菌性阴道炎患者阴道灌洗液白细胞介素2（IL2）、白细胞介素8（IL8）、白细胞介素10（IL10）、肿瘤坏死因子α（TNFα）的水平，现将结果报道如下。
对象与方法
1.研究对象 2005年3月~2009年12月，选择在我院妇产科门诊就诊的患者。根据临床症状、体征及细菌学检查，确诊为霉菌性阴道炎患者85例，年龄21～49岁，平均(39.6±2.5)岁，病程2天～5个月，平均(25.5±2.1)天，所有患者抽血及留取阴道灌洗液测定细胞免疫因子；正常对照组选取同期行健康体检的妇女80人，年龄22～46岁，平均(38.2±3.9)岁，月经规律，6个月内未服用甾体类激素，1周内无性生活和阴道冲洗。妇科检查及细胞学检查无异常。两组年龄、病程等一般资料比较无显著性差异(P＞0.05)，具有可比性。
2.标本采集 取阴道上1/3侧壁分泌物行病原体检查，暴露宫颈后，先用棉签擦拭去宫颈口周围的黏液及分泌物，将无菌拭子伸入宫颈口2～5 cm,轻轻转动无菌拭子保留10～15 s，获取宫颈上皮细胞作细胞学检查，再用4 ml灭菌生理盐水冲洗宫颈表面及阴道上段，于后穹窿吸出灌洗液3 ml,－20℃冻存待测。同时霉菌性阴道炎患者和正常对照组人群每人抽血3 ml,分离血清作细胞因子检测。
3.试剂和仪器 IL2、IL8、IL10和TNFα测定试剂购自深圳晶美生物医学工程公司，包括IL2、IL8、IL10和TNFα的标准品，1%小牛磷酸盐缓冲液（1%BSAPBS）作为标准品/样本稀释液，生物素化抗体，亲和素辣根过氧化物酶复合物，酶结合物稀释液，生物素化抗体稀释液，0.05%Tween20/PBS洗涤液，显色剂及终止液（H2SO4）。仪器有96孔酶标板、DJ3022A型酶标仪、MM1型微量振荡器和HH.W21.600电热型恒温水温箱。
4.检测方法 细胞因子IL2、IL8、IL10和TNFα均采用双抗体夹心ELISA法检测。将抗人IL2或IL8或IL10或TNFα单抗包被于酶标板上，加标本/标准品和生物素标记的抗体，两抗体与标准品中的细胞因子形成“抗体细胞因子抗体”复合物，游离的成分被洗去，再加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合，未结合的部分被洗去。加入显色剂，若反应孔中待测的细胞因子有蓝色出现，加终止液变黄，在450 nm处测吸光度OD值，通过绘制标准曲线求出相应的细胞因子的浓度。
5统计学方法 所有数据采用SPSS 10.0软件包统计学处理。计量资料采用均数±标准差(-±s)表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为有显著性差异。
结果
1.血清及阴道灌洗液细胞因子的含量 霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中IL2、IL8、IL10和TNFα与正常对照组比较有显著性差异（P＜0.05或0.01）。霉菌性阴道炎组各观察指标均高于对照组。见表1、2。
2.两组IL2、IL8、IL10和TNFα检测结果相关性分析 两组IL2与IL8及 IL10在血清中无明显相关性（r分别为0.041和0.053,P＞0.05），阴道灌洗液中呈正相关（r分别为0.257和0.359,P＜0.01）；IL2与TNFα在血清及阴道灌洗液中均无相关性（r分别为0.058和0.068,P＞0.05）；IL8 与IL10及TNFα在血清及阴道灌洗液中均无相关性（r分别为0.042和0.023， P＞0.05）；IL10 和TNFα之间在血清及阴道灌洗液中呈正相关（r为0.523和0.547，P＜0.01）。
讨论
本研究结果显示，正常人群及霉菌性阴道炎患者阴道灌洗液中都可以检测出细胞因子IL2、IL8、IL10和TNFα，提示细胞因子在阴道局部免疫中有一定的作用。有研究报道，体外培养的人阴道上皮细胞传代后分别与假丝酵母菌孢子型共培养，发现假丝酵母菌感染的人阴道上皮细胞时，白细胞介素IL10及肿瘤坏死因子α的水平均有分泌增加［2~4］，说明阴道细胞在致炎因素的作用下，本身就可以分泌细胞因子，在阴道局部免疫中发挥作用。
IL2属于Th1细胞因子，主要参与介导细胞免疫反应；IL10属于Th2细胞因子，主要参与体液免疫反应。IL10 可明显抑制炎症介质TNFα、IL1β的表达,不影响抗炎介质表达,有利于重建炎症介质/抗炎介质平衡。IL10 能在转录、转录后两个阶段上影响前炎症因子的水平,IL10 能抑制前炎性细胞因子相应基因的转录而阻断其合成,同时IL10 还能影响前炎性细胞因子mRNA 的稳定性,使得其水平下降。炎症性细胞因子同时也调节着IL10 的产生,当单核细胞受到LPS 的刺激后,炎症性细胞因子TNFα等的产生增加,随后抑炎性细胞因子IL10 的产生也增加,TNFα能刺激IL10 mRNA产生增加及IL10水平升高,这是一种负反馈调节,这种促炎、抗炎的相互作用贯穿着机体的炎症反应过程［5］。本研究发现，霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中各观察指标的水平与同期正常对照组比较均有统计学意义。说明细胞因子可能通过参与体液免疫反应而影响炎症的进程，能有效地抑制前炎症细胞因子吸引和趋化炎症细胞，参与炎症过程［6］。并在霉菌性阴道炎过程中与TNFα之间有一定的相关性及协同作用，参与复杂的细胞因子网络调节。
IL8主要来源于单核细胞，具有广泛的生物学作用，对中性粒细胞、T淋巴细胞和嗜碱性细胞具有强烈的趋化作用。本文结果显示，霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中IL8水平升高，推测IL8在霉菌性阴道炎所致的下生殖道感染的发病中具有一定的意义。
TNFα主要由巨噬细胞产生。作为前炎症因子，其生物活性主要刺激单核巨噬细胞及其它多种细胞产生细胞因子。本研究霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中TNFα水平均升高，推测阴道上皮细胞等也可能直接产生TNFα，并诱导或直接损伤阴道上皮细胞，加重炎症反应。另外，笔者发现TNFα含量与IL10含量有一定的相关性，表明两者之间可能有某种相互作用，有待于进一步的研究。
参考文献
［1］FidelPL Jr,SobelJD.The role of cellmediated immunityin candidiasis［J］.Trends Microbiol,1994,2(6):202-206.
［2］Liu ZH,Wu WX, Liao QP.Candida albicans growth inhibition by tumor necrosis factoralpha in vaginal epithelial cells［J］.Int J Gynecol Obstet, 2007,97(3):203-204.
［3］Aoki J,Roifman CA,Lian CM,etal.IL2 receptor alpha deficiency and features of primarybiliary cirrhosis［J］.J Autoimmun,2006,27(1):50-53.
［4］Lakoski SG,Liu Y,Brosnihan KB,et al.Interleukin10 concentration and coronary heart diseaseevent risk in the estrogen replacement and atherosclerosisstudy［J］.Atherosclerosis,2008,197(1):443-447.
［5］吴 彬,但 伶.CD40/CD40L与肿瘤坏死因子α、白细胞介素10在炎症中的作用［J］.重庆医学, 2007,36(17)：1771-1773.
［6］Fan SR,Liao QP,Liu XP,et al.Vaginal allergic response in women with vulvovaginalcandidiasis［J］.Int JGynecol Obstet 2008,101(1):27-30.
(收稿日期：2010-03-15 修回日期：2010-04-12)
(编辑：崔群飞 英文审校：钟京梓)
【关键词】 霉菌性阴道炎；白细胞介素类；肿瘤坏死因子；T淋巴细胞
文章编号：1003-1383(2010)02-0136-02 中图分类号：R 711.31 文献标识码：A
doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2010.02.008
Clinical significance of the change of IL2,IL8,IL10 and TNFαin patients with mycotic vaginitis
ZHAO Suping,HUANG Yuena,WEN Yanping,LI Wenlian,LI Yuanjun,PAN Xiaoju,DONG Bizhen
(Department of Gynemetrics,The Hospital of Tradition Chinese Medicine Qiannan Autonomous Prefecturefor Buyi and Miao Nationalities of Guizhou province,Duyun 558000,China)
【Abstract】 Objective To evaluate the pathogenesis role of IL2,IL8，IL10 and TNFαin patients with mycotic vaginitis.
Methods Serum and vaginal lavage were collected from 85 patients with viginitis fungosa and 80 healthy women,then frozen to -20℃.The concentration of IL2,IL8,IL10 and TNFαinwere detected by doublesandwich elisa.Results The level of IL2,IL8 and TL10 and TNFαin serum and vaginal lavage of treatment group was significantly higher than that of control group(P＜0.05 or 0.01).Con
clusion Cylokines such as IL2,IL8,IL10 and TNFα play an role in the pathogenesis of viginitis fungosa.TNFα may participate and mediate the immune injury directly.
【Key words】 mycotic vaginitis;interleukins;tumour necrosis factor；Tlymphovytes
霉菌性阴道炎是妇科门诊的常见病。下生殖道感染时，机体免疫系统的变化是临床关注的重点，阴道局部的免疫变化与全身免疫变化不一致，霉菌性阴道炎的发生可能与局部免疫功能异常有关［1］。为了探讨霉菌性阴道炎患者阴道局部免疫状态的变化，我们检测霉菌性阴道炎患者阴道灌洗液白细胞介素2（IL2）、白细胞介素8（IL8）、白细胞介素10（IL10）、肿瘤坏死因子α（TNFα）的水平，现将结果报道如下。
对象与方法
1.研究对象 2005年3月~2009年12月，选择在我院妇产科门诊就诊的患者。根据临床症状、体征及细菌学检查，确诊为霉菌性阴道炎患者85例，年龄21～49岁，平均(39.6±2.5)岁，病程2天～5个月，平均(25.5±2.1)天，所有患者抽血及留取阴道灌洗液测定细胞免疫因子；正常对照组选取同期行健康体检的妇女80人，年龄22～46岁，平均(38.2±3.9)岁，月经规律，6个月内未服用甾体类激素，1周内无性生活和阴道冲洗。妇科检查及细胞学检查无异常。两组年龄、病程等一般资料比较无显著性差异(P＞0.05)，具有可比性。
2.标本采集 取阴道上1/3侧壁分泌物行病原体检查，暴露宫颈后，先用棉签擦拭去宫颈口周围的黏液及分泌物，将无菌拭子伸入宫颈口2～5 cm,轻轻转动无菌拭子保留10～15 s，获取宫颈上皮细胞作细胞学检查，再用4 ml灭菌生理盐水冲洗宫颈表面及阴道上段，于后穹窿吸出灌洗液3 ml,－20℃冻存待测。同时霉菌性阴道炎患者和正常对照组人群每人抽血3 ml,分离血清作细胞因子检测。
3.试剂和仪器 IL2、IL8、IL10和TNFα测定试剂购自深圳晶美生物医学工程公司，包括IL2、IL8、IL10和TNFα的标准品，1%小牛磷酸盐缓冲液（1%BSAPBS）作为标准品/样本稀释液，生物素化抗体，亲和素辣根过氧化物酶复合物，酶结合物稀释液，生物素化抗体稀释液，0.05%Tween20/PBS洗涤液，显色剂及终止液（H2SO4）。仪器有96孔酶标板、DJ3022A型酶标仪、MM1型微量振荡器和HH.W21.600电热型恒温水温箱。
4.检测方法 细胞因子IL2、IL8、IL10和TNFα均采用双抗体夹心ELISA法检测。将抗人IL2或IL8或IL10或TNFα单抗包被于酶标板上，加标本/标准品和生物素标记的抗体，两抗体与标准品中的细胞因子形成“抗体细胞因子抗体”复合物，游离的成分被洗去，再加入辣根过氧化物酶标记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合，未结合的部分被洗去。加入显色剂，若反应孔中待测的细胞因子有蓝色出现，加终止液变黄，在450 nm处测吸光度OD值，通过绘制标准曲线求出相应的细胞因子的浓度。
5统计学方法 所有数据采用SPSS 10.0软件包统计学处理。计量资料采用均数±标准差(-±s)表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为有显著性差异。
结果
1.血清及阴道灌洗液细胞因子的含量 霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中IL2、IL8、IL10和TNFα与正常对照组比较有显著性差异（P＜0.05或0.01）。霉菌性阴道炎组各观察指标均高于对照组。见表1、2。
2.两组IL2、IL8、IL10和TNFα检测结果相关性分析 两组IL2与IL8及 IL10在血清中无明显相关性（r分别为0.041和0.053,P＞0.05），阴道灌洗液中呈正相关（r分别为0.257和0.359,P＜0.01）；IL2与TNFα在血清及阴道灌洗液中均无相关性（r分别为0.058和0.068,P＞0.05）；IL8 与IL10及TNFα在血清及阴道灌洗液中均无相关性（r分别为0.042和0.023， P＞0.05）；IL10 和TNFα之间在血清及阴道灌洗液中呈正相关（r为0.523和0.547，P＜0.01）。
讨论
本研究结果显示，正常人群及霉菌性阴道炎患者阴道灌洗液中都可以检测出细胞因子IL2、IL8、IL10和TNFα，提示细胞因子在阴道局部免疫中有一定的作用。有研究报道，体外培养的人阴道上皮细胞传代后分别与假丝酵母菌孢子型共培养，发现假丝酵母菌感染的人阴道上皮细胞时，白细胞介素IL10及肿瘤坏死因子α的水平均有分泌增加［2~4］，说明阴道细胞在致炎因素的作用下，本身就可以分泌细胞因子，在阴道局部免疫中发挥作用。
IL2属于Th1细胞因子，主要参与介导细胞免疫反应；IL10属于Th2细胞因子，主要参与体液免疫反应。IL10 可明显抑制炎症介质TNFα、IL1β的表达,不影响抗炎介质表达,有利于重建炎症介质/抗炎介质平衡。IL10 能在转录、转录后两个阶段上影响前炎症因子的水平,IL10 能抑制前炎性细胞因子相应基因的转录而阻断其合成,同时IL10 还能影响前炎性细胞因子mRNA 的稳定性,使得其水平下降。炎症性细胞因子同时也调节着IL10 的产生,当单核细胞受到LPS 的刺激后,炎症性细胞因子TNFα等的产生增加,随后抑炎性细胞因子IL10 的产生也增加,TNFα能刺激IL10 mRNA产生增加及IL10水平升高,这是一种负反馈调节,这种促炎、抗炎的相互作用贯穿着机体的炎症反应过程［5］。本研究发现，霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中各观察指标的水平与同期正常对照组比较均有统计学意义。说明细胞因子可能通过参与体液免疫反应而影响炎症的进程，能有效地抑制前炎症细胞因子吸引和趋化炎症细胞，参与炎症过程［6］。并在霉菌性阴道炎过程中与TNFα之间有一定的相关性及协同作用，参与复杂的细胞因子网络调节。
IL8主要来源于单核细胞，具有广泛的生物学作用，对中性粒细胞、T淋巴细胞和嗜碱性细胞具有强烈的趋化作用。本文结果显示，霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中IL8水平升高，推测IL8在霉菌性阴道炎所致的下生殖道感染的发病中具有一定的意义。
TNFα主要由巨噬细胞产生。作为前炎症因子，其生物活性主要刺激单核巨噬细胞及其它多种细胞产生细胞因子。本研究霉菌性阴道炎患者血清及阴道灌洗液中TNFα水平均升高，推测阴道上皮细胞等也可能直接产生TNFα，并诱导或直接损伤阴道上皮细胞，加重炎症反应。另外，笔者发现TNFα含量与IL10含量有一定的相关性，表明两者之间可能有某种相互作用，有待于进一步的研究。
参考文献
［1］FidelPL Jr,SobelJD.The role of cellmediated immunityin candidiasis［J］.Trends Microbiol,1994,2(6):202-206.
［2］Liu ZH,Wu WX, Liao QP.Candida albicans growth inhibition by tumor necrosis factoralpha in vaginal epithelial cells［J］.Int J Gynecol Obstet, 2007,97(3):203-204.
［3］Aoki J,Roifman CA,Lian CM,etal.IL2 receptor alpha deficiency and features of primarybiliary cirrhosis［J］.J Autoimmun,2006,27(1):50-53.
［4］Lakoski SG,Liu Y,Brosnihan KB,et al.Interleukin10 concentration and coronary heart diseaseevent risk in the estrogen replacement and atherosclerosisstudy［J］.Atherosclerosis,2008,197(1):443-447.
［5］吴 彬,但 伶.CD40/CD40L与肿瘤坏死因子α、白细胞介素10在炎症中的作用［J］.重庆医学, 2007,36(17)：1771-1773.
［6］Fan SR,Liao QP,Liu XP,et al.Vaginal allergic response in women with vulvovaginalcandidiasis［J］.Int JGynecol Obstet 2008,101(1):27-30.
(收稿日期：2010-03-15 修回日期：2010-04-12)
(编辑：崔群飞 英文审校：钟京梓)