【摘 要】
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为了利用大肠杆菌高效生产重组磷脂酶,克隆了液化沙雷氏菌磷脂酶A1的编码基因pla,分别使用pET-28a(+)和pET-20b(+)载体,实现了磷脂酶A1在大肠杆菌BL21(DE3)中的功能表达。重
【机 构】
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江南大学食品科学与技术国家重点实验室 粮食发酵工艺与技术国家工程实验室 工业生物技术教育部重点实验室;
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2011AA100905);教育部“新世纪优秀人才支持计划”(No.NCET-11-0665);江南大学食品科学与技术国家重点实验室自由探索课题(No.SKLF-ZZA-201201)资助~~
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为了利用大肠杆菌高效生产重组磷脂酶,克隆了液化沙雷氏菌磷脂酶A1的编码基因pla,分别使用pET-28a(+)和pET-20b(+)载体,实现了磷脂酶A1在大肠杆菌BL21(DE3)中的功能表达。重组菌利用载体pET-28a(+)在原始信号肽的介导下胞外PLA1酶活达40.8 U/mL,占总酶活的91%。重组菌转接至优化后的发酵诱导培养基:蛋白胨10 g/L,酵母粉5 g/L,葡萄糖0.8 g/L,乳糖5 g/L,25 mmol/L Na2HPO4,25 mmol/L KH2PO4和1 mmol/L MgSO4;菌体生长6 h后,添加7.5 g/L的甘氨酸,37℃恒温发酵24 h,重组菌胞外PLA1酶活达到128.7 U/mL。
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