【摘 要】
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目的 研究microRNA-378b（miR-378b）对心脏成纤维细胞的纤维化水平的影响及分子机制。方法 小鼠行慢性心肌梗死手术构建体内心肌纤维化模型，利用转化生长因子-β（TGF-β）诱导原代心脏成纤维细胞发生纤维化以构建体外心肌纤维化模型；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测2种纤维化模型中miR-378b的表达水平；Western blotting法检测miR-378b模拟物和抑制物
【基金项目】
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南京市卫生科技发展专项资金项目计划（YKK19052）；
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目的 研究microRNA-378b（miR-378b）对心脏成纤维细胞的纤维化水平的影响及分子机制。方法 小鼠行慢性心肌梗死手术构建体内心肌纤维化模型，利用转化生长因子-β（TGF-β）诱导原代心脏成纤维细胞发生纤维化以构建体外心肌纤维化模型；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测2种纤维化模型中miR-378b的表达水平；Western blotting法检测miR-378b模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA，心肌纤维化特异性指标）表达量的影响；TargetScan、miRDB和miRWalk软件预测miR-378b的下游靶基因，双荧光素酶实验验证miR-378b与生长相关蛋白43（GAP43）的靶向关系；Western blotting法检测miR-378b模拟物和抑制物对心脏成纤维细胞GAP43表达的影响；Western blotting法检测体内和体外2种纤维化模型中GAP43的蛋白水平。结果 小鼠心肌纤维化模型组miR-378b表达量较假手术组显著降低（P＜0.01），心脏成纤维细胞TGF-β处理组miR-378b表达量较对照组显著降低（P＜0.001）。在基础水平和TGF-β处理后，与对照模拟物组比较，miR-378b模拟物显著降低细胞的α-SMA蛋白水平（P＜0.05）；在基础水平，与对照抑制物组比较，miR-378b抑制物可显著升高细胞的α-SMA蛋白水平（P＜0.05）；但在TGF-β处理的细胞中，miR-378b抑制物不能进一步增加α-SMA蛋白表达量。GAP43是miR-378b直接作用的下游靶基因，与对照组比较，miR-378b可负调控心脏成纤维细胞GAP43的蛋白表达水平（P＜0.01）。心肌纤维化模型组小鼠心肌GAP43蛋白表达量较假手术组显著升高（P＜0.01），心脏成纤维细胞TGF-β处理组GAP43蛋白表达量较对照组显著升高（P＜0.001）。结论 miR-378b可抑制心脏成纤维细胞纤维化，该功能可能通过抑制其下游靶基因GAP43发挥作用。
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