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摘 要：本文采用高校液相测定了罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量，固定相为：Kromasil C18液相色谱柱（150*4.6mm，5un），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5）-乙腈（90：10）为流动相，检测波长为210nm；罗红霉素在5～35μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。罗红霉素的平均回收率为99.6%，RSD为0.53%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量测定。
关键词：罗红霉素胶囊；罗红霉素；含量
罗红霉素英文名为Roxithromycin，为半合成的14元环大环内酯类抗生素，是新一代大环内酯类抗生素。罗红霉素抗菌谱与抗菌作用基本上与红霉素相仿，其体外抗菌作用与红霉素相类似，体内抗菌作用比红霉素强1-4倍。罗红霉素对肺炎衣原体、肺炎支原体、溶脲脲原体的抗微生物作用与红霉素相仿或略强，对革兰阳性菌的作用较红霉素略差。罗红霉素可透过细菌细胞膜，阻断了转移核糖核酸（t-RNA）结合至“P”位上，同时也阻断了多肽链自受位（“A” 位）至“P”位的转移，因而细菌蛋白质合成受到抑制。罗红霉素适用于化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎，敏感菌所致的鼻窦炎﹑中耳炎﹑急性支气管炎，沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎；敏感细菌引起的皮肤软组织感染。本文采用高效液相法对罗红霉素胶囊中的罗红霉素的进行了含量测定。
1 仪器与试药
P1201高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；8800系列美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；WP-UP-Ⅲ-20精密型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）；MTN-2800D氮吹浓缩装置（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；Kromasil C18色谱柱250x4.6mm 5um C18）（北京颇赛科技发展有限公司）；UV1902PC双光束紫外可见分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）；UV-9600紫外/可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；JA5003电子精密天平（上海衡平仪器仪表厂）；IS126经济型pH计（上海仪迈仪器科技有限公司）；HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-6]。色谱柱为Kromasil C18液相色谱柱；0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5）-乙腈（90：10）为流动相；检测波长为210nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按罗红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2 提取方法确定
2.2.1 提取溶媒的选择。分别选用了稀乙醇、50%甲醇、流动相对罗红霉素胶囊进行提取，结果表明采用流动相提取时罗红霉素含量最高。
2.2.2 提取时间的选择。取罗红霉素胶囊适量，研碎，精密称定，用稀乙醇超声波振荡分别提取5、10、15分钟，含量结果表明：三种提取时间结果无明显差异，为保证提取完全并缩短处理时间，采用超声提取10分钟。
2.3 供试品溶液的制备
取罗红霉素胶囊内容物适量，研细，精密称取，置50mL量瓶中，加流动相适量，超声处理提取25分钟，放置至室温，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 对照品溶液的制备
精密称取罗红霉素对照品约1mg，置50mL容量瓶中，用加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含罗红霉素20μg）。
2.5 阴性干扰试验
取除罗红霉素的辅料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与罗红霉素相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与罗红霉素相同保留时间处不存在吸收峰，因此说明选定的条件测定罗红霉素无干扰，具有较强的专属性。
2.6 标准曲线的制备
制备浓度为5、10、15、20、25、30、35μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，罗红霉素对照品在5～35μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取罗红霉素对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.82%。结果表明，本实验精密度良好。
2.8 重现性试验
分别称取同批罗红霉素胶囊样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值为0.53%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.9 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品罗红霉素峰面积积分值的RSD为0.55%。结果表明罗红霉素至少在8小时内稳定。
2.10 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的罗红霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.6%，RSD为0.53%。
2.11 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定罗红霉素胶囊三批样品中罗红霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的99.3%、100.1%、99.1%。
3 讨论
分别考察0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （80：20），甲醇-乙腈-水-三乙胺-磷酸（30：20：50：0.2：0.1），甲醇-乙腈-水-三乙胺-磷酸（30：10：60：0.3：0.1），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （90：10），甲醇-乙腈-冰醋酸（60∶40：0.1）不同比例的流动相，结果以0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （90：10）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （90：10）为流动相。本方法简单、快捷、准确。实验表明此方法可用于罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量测定。罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量为标示量的95%-105%。
参考文献
[1]喻樊，施文君.高效液相色谱法测定罗红霉素胶囊中罗红霉素的质量[J].抗感染药学，2010（3）.
[2]马春宏，李东影，王仁章，尹彦苏，王良.红霉素类抗生素分析研究进展[J].长春师范学院学报（自然科学版），2008（8）.
[3]李文仕.RP-HPLC法测定罗红霉素片中罗红霉素的含量[J].安徽医药，2008（3）.
[4]徐洁，陈琪.高效液相色谱法测定罗红霉素胶囊的含量[J].海峡药学，2004（5）.
[5]喻樊，施文君.高效液相色谱法测定罗红霉素胶囊中罗红霉素的质量[J].抗感染药学，2010（3）.
[6]陈任宏，马亚珍，唐省三，蔡自由，卓菊.HPLC法测定罗红霉素片中罗红霉素的含量[J].中国现代药物应用，2007（11）.
关键词：罗红霉素胶囊；罗红霉素；含量
罗红霉素英文名为Roxithromycin，为半合成的14元环大环内酯类抗生素，是新一代大环内酯类抗生素。罗红霉素抗菌谱与抗菌作用基本上与红霉素相仿，其体外抗菌作用与红霉素相类似，体内抗菌作用比红霉素强1-4倍。罗红霉素对肺炎衣原体、肺炎支原体、溶脲脲原体的抗微生物作用与红霉素相仿或略强，对革兰阳性菌的作用较红霉素略差。罗红霉素可透过细菌细胞膜，阻断了转移核糖核酸（t-RNA）结合至“P”位上，同时也阻断了多肽链自受位（“A” 位）至“P”位的转移，因而细菌蛋白质合成受到抑制。罗红霉素适用于化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎，敏感菌所致的鼻窦炎﹑中耳炎﹑急性支气管炎，沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎；敏感细菌引起的皮肤软组织感染。本文采用高效液相法对罗红霉素胶囊中的罗红霉素的进行了含量测定。
1 仪器与试药
P1201高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；8800系列美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；WP-UP-Ⅲ-20精密型实验室专用超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）；MTN-2800D氮吹浓缩装置（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；Kromasil C18色谱柱250x4.6mm 5um C18）（北京颇赛科技发展有限公司）；UV1902PC双光束紫外可见分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）；UV-9600紫外/可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；JA5003电子精密天平（上海衡平仪器仪表厂）；IS126经济型pH计（上海仪迈仪器科技有限公司）；HQ-50高端试剂级超纯水机（郑州华新电气公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-6]。色谱柱为Kromasil C18液相色谱柱；0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5）-乙腈（90：10）为流动相；检测波长为210nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按罗红霉素峰计算应不得低于2000。
2.2 提取方法确定
2.2.1 提取溶媒的选择。分别选用了稀乙醇、50%甲醇、流动相对罗红霉素胶囊进行提取，结果表明采用流动相提取时罗红霉素含量最高。
2.2.2 提取时间的选择。取罗红霉素胶囊适量，研碎，精密称定，用稀乙醇超声波振荡分别提取5、10、15分钟，含量结果表明：三种提取时间结果无明显差异，为保证提取完全并缩短处理时间，采用超声提取10分钟。
2.3 供试品溶液的制备
取罗红霉素胶囊内容物适量，研细，精密称取，置50mL量瓶中，加流动相适量，超声处理提取25分钟，放置至室温，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 对照品溶液的制备
精密称取罗红霉素对照品约1mg，置50mL容量瓶中，用加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含罗红霉素20μg）。
2.5 阴性干扰试验
取除罗红霉素的辅料，按方中比例和制备工艺方法制成阴性制剂，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与罗红霉素相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果表明：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与罗红霉素相同保留时间处不存在吸收峰，因此说明选定的条件测定罗红霉素无干扰，具有较强的专属性。
2.6 标准曲线的制备
制备浓度为5、10、15、20、25、30、35μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，罗红霉素对照品在5～35μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取罗红霉素对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.82%。结果表明，本实验精密度良好。
2.8 重现性试验
分别称取同批罗红霉素胶囊样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量，并计算样品的RSD值为0.53%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.9 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品罗红霉素峰面积积分值的RSD为0.55%。结果表明罗红霉素至少在8小时内稳定。
2.10 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的罗红霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.6%，RSD为0.53%。
2.11 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定罗红霉素胶囊三批样品中罗红霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的99.3%、100.1%、99.1%。
3 讨论
分别考察0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （80：20），甲醇-乙腈-水-三乙胺-磷酸（30：20：50：0.2：0.1），甲醇-乙腈-水-三乙胺-磷酸（30：10：60：0.3：0.1），0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （90：10），甲醇-乙腈-冰醋酸（60∶40：0.1）不同比例的流动相，结果以0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （90：10）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（三乙胺调节pH至6.5） -乙腈 （90：10）为流动相。本方法简单、快捷、准确。实验表明此方法可用于罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量测定。罗红霉素胶囊中罗红霉素的含量为标示量的95%-105%。
参考文献
[1]喻樊，施文君.高效液相色谱法测定罗红霉素胶囊中罗红霉素的质量[J].抗感染药学，2010（3）.
[2]马春宏，李东影，王仁章，尹彦苏，王良.红霉素类抗生素分析研究进展[J].长春师范学院学报（自然科学版），2008（8）.
[3]李文仕.RP-HPLC法测定罗红霉素片中罗红霉素的含量[J].安徽医药，2008（3）.
[4]徐洁，陈琪.高效液相色谱法测定罗红霉素胶囊的含量[J].海峡药学，2004（5）.
[5]喻樊，施文君.高效液相色谱法测定罗红霉素胶囊中罗红霉素的质量[J].抗感染药学，2010（3）.
[6]陈任宏，马亚珍，唐省三，蔡自由，卓菊.HPLC法测定罗红霉素片中罗红霉素的含量[J].中国现代药物应用，2007（11）.