目的：构建靶向TPBG和EGFR的双特异性抗体偶联药物（BispecificAntibodyDrugConjugate，BsADC），并探究其在体内外抗肿瘤活性。方法：通过携带全人抗体重链可变区和共同轻链的新型小鼠的RenLite技术平台获得具有共同轻链的靶向胚胎滋养层糖蛋白（TrophoblastGlycoprotein，TPBG，也称为5T4）和表皮生长因子受体（Epidermal Growth FactorReceptor，EGFR）的抗体序列，采用KIH（Knobs-Into-Holes）技术将其组装成anti-TPBG×EGFR双特异性抗体（BispecificAntibody，BsAb），并通过流式细胞术（FlowCytometry，FCM）、表面等离子共振技术（SurfacePlasmonResonance，SPR）、高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）等方法进行体外表征，最后采用半胱氨酸偶联技术将其与微管蛋白抑制剂甲基澳瑞他汀E（MonoMethyl auristatin E，MMAE）偶联成药物抗体偶联比（Drug to antibody ration，DAR）为4的anti-TPBG×EGFR BsADC，并研究其体外杀伤作用和在人源肿瘤细胞系异种移植模型（Cell Derived Xenograft，CDX）中的抗肿瘤活性。结果：根据GEPIA2数据库，TPBG与EGFR在多种肿瘤上具有共表达。通过对5种人源性肿瘤组织异种移植（Patient-Derived Xenografts ，PDX）免疫荧光分析也证实TPBG和EGFR在肿瘤细胞中具有不同比例的共表达。通过RenLite平台成功制备高纯度靶向TPBG和EGFR的双抗。经体外实验结果表明，BsAb相较于TPBG母本单抗显著增强了与肿瘤细胞的结合亲和力（avidity）和内吞速率。BsADC相较于TPBG母本单抗ADC明显提高了肿瘤杀伤和抗肿瘤活性。在A431(EGFRhigh/TPBGlow)模型中，anti-TPBG×EGFR BsADC体内抗肿瘤活性强于TPBG和EGFR的母本单抗ADC，表现出协同作用。另外，在NCI-H292(EGFRmoderate /TPBGlow)模型和DU145(EGFRlow /TPBG low)模型中，anti-TPBG×EGFR BsADC均表现出良好的体内抗肿瘤活性。结论：实验结果表明，将TPBG与快速内化的ADC靶标EGFR组合是增强靶向TPBG的ADC内化和抗肿瘤活性的强有力策略。