【摘 要】
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目的 探讨成体人肝源性干细胞外泌体（HLSC-exo）不同时间静脉注射对刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 差速离心法提取HLSC-exo, Western blot检测其标志蛋白CD9、CD63的表达，纳米颗粒跟踪分析粒径分布。将56只C57BL/6雄性小鼠随机分为3组，空白对照组、ConA模型组和HLSC-exo治疗组。根据给予磷酸盐缓冲液或HLSC-exo后再注射Co
【基金项目】
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国家自然科学基金（81170395,81570556）； 中国肝炎防治基金会-天晴肝病研究基金资助课题（TQGB20210013）～～；
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目的 探讨成体人肝源性干细胞外泌体（HLSC-exo）不同时间静脉注射对刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 差速离心法提取HLSC-exo, Western blot检测其标志蛋白CD9、CD63的表达，纳米颗粒跟踪分析粒径分布。将56只C57BL/6雄性小鼠随机分为3组，空白对照组、ConA模型组和HLSC-exo治疗组。根据给予磷酸盐缓冲液或HLSC-exo后再注射ConA间隔时间不同，分为3 h、6 h、12 h亚组；检测血清中ALT、AST、TNFα、IL-10水平；比较各组小鼠肝脏大体形态及病理组织变化。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。结果 HLSC-exo是直径为90～110 nm的囊泡体，电镜下可见清晰的“茶托样”结构，其特异性标志蛋白CD9和CD63均有明显的表达；空白对照组小鼠ALT、AST水平分别为（31.81±6.74）U/L、（69.75±8.30）U/L。相较于空白对照组,ConA 3 h、6 h、12 h模型组小鼠ALT、AST水平明显升高（P值均＜0.001）;HLSC-exo 3 h、6 h治疗组ALT、AST水平较ConA 3 h、6 h模型组明显下降[（225.58±115.59）U/L vs （1989.32±347.67）U/L、（1174.71±203.30）U/L vs （2208.33±349.96）U/L,（303.53±126.68）U/L vs （2534.27±644.72）U/L、（1340.70±262.56）U/L vs （2437.13±288.13）U/L,P值均＜0.001];与HLSC-exo 6 h治疗组相比,HLSC-exo 3 h治疗组下降更明显（P＜0.001）。空白对照组小鼠IL-10、TNFα水平分别为（313.51±10.97）pg/mL,（476.05±7.31）pg/mL。相较于空白对照组,ConA3 h、6 h、12 h模型组IL-10水平均明显下降（P值均＜0.001）;HLSC-exo 3 h、6 h治疗组IL-10水平相较于ConA 3 h、6 h模型组明显升高[（331.61±10.46）pg/mL vs （266.20±8.15）pg/mL、（288.13±10.74）pg/mL vs （264.41±9.12）pg/mL,P值均＜0.001];且与HLSC-exo 6 h治疗组相比,HLSC-exo 3 h治疗组升高更明显（P＜0.001）。相较于空白对照组,ConA 3 h、6 h、12 h模型组TNFα水平较正常组明显升高（P值均＜0.001）;HLSC-exo 3 h、6 h治疗组TNFα水平相较于ConA 3 h、6 h模型组明显下降[（478.26±12.99）pg/mL vs （551.31±17.70）pg/mL、（515.58±7.18）pg/mL vs （556.21±11.15）pg/mL,P值均＜0.001];且与HLSC-exo 6 h治疗组相比,HLSC-exo 3 h治疗组下降更明显（P＜0.001）。小鼠肝脏大体形态及病理显示HLSC-exo 3 h、6 h治疗组肝细胞坏死程度较ConA 3 h、6 h模型组明显减轻,HLSC-exo 3 h治疗组肝小叶结构基本完整，仅可见散在点状坏死;HLSC-exo 12 h治疗组与ConA 12 h模型组相比，肝细胞坏死无明显改善。结论 成体人肝源性干细胞外泌体静脉注射可以减轻ConA诱导的小鼠急性肝损伤，以提前3 h注射保护作用最显著。通过调控细胞因子是HLSC-exo减轻肝损伤的重要机制之一。
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