【摘 要】
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葱蝇Delia antiqua(Meigen)具有冬滞育的特性且与黑腹果蝇Drosophila melanogaster近缘。该研究目的在于构建葱蝇冬滞育蛹的全长cDNA文库,为进一步的冬滞育专化基因筛选、克
【机 构】
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昆虫与分子生物学研究所重庆高校生物活性物质工程研究中心重庆高校动物生物学重点实验室,
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葱蝇Delia antiqua(Meigen)具有冬滞育的特性且与黑腹果蝇Drosophila melanogaster近缘。该研究目的在于构建葱蝇冬滞育蛹的全长cDNA文库,为进一步的冬滞育专化基因筛选、克隆、和表达分析奠定基础。利用RNAiso试剂盒提取葱蝇冬滞育蛹的总RNA,采用SMART技术合成全长cDNA,经SfiⅠ酶切消化后,将cDNA克隆到质粒载体pDNR-LIB。经鉴定,原始文库的滴度为2.4×107cfu/mL。随机挑取15个克隆,经PCR快速鉴定,插入片段大小在0.5～3kb之间,平均大小在1kb左右,重组率达100%。结果表明该研究获得高质量的葱蝇冬滞育蛹cDNA文库。
Delia antiqua (Meigen) has winter diapause characteristics and is closely related to Drosophila melanogaster. The purpose of this study was to construct a full-length cDNA library of diapause fly larvae in order to further lay the foundation for further screening, cloning, and expression analysis of winter diapause genes. RNAiso kit was used to extract the total RNA of diapause pupae. The full-length cDNA was synthesized by SMART technique and digested with SfiI. The cDNA was then cloned into plasmid pDNR-LIB. The titers of the original library were identified as 2.4 × 10 7 cfu / mL. Fifteen clones were randomly selected and identified by PCR. The size of the inserted fragment was between 0.5 and 3kb, with an average size of about 1kb and the recombination rate was 100%. The results showed that this study obtained high quality diapause winter diapause pupae cDNA library.
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